Identificação molecular de deteriorantes mesófilos em leite cru refrigerado
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Resumo: A baixa qualidade do leite cru e reduzida vida útil do leite pasteurizado no Brasil causados pela deterioração dos constituintes do leite por parte dos microrganismos deteriorantes reflete diretamente seu potencial tecnológico para indústria Conhecer os microrganismos deteriorantes que constituem a microbiota do leite cru refrigerado possibilita identificar a origem destes contaminantes, desta forma permite-se estabelecer ações de controle para evitar sua presença no leite O objetivo deste estudo foi identificar geneticamente a microbiota mesofílica deteriorante do leite cru refrigerado da região de Castro-PR por meio de ferramentas moleculares afim de caracterizar a microbiota com atividade proteolítica e lipolítica Foram coletadas 18 amostras de leite cru refrigerado direto dos tanques de expansão de propriedades da região centro-oriental do Paraná As propriedades eram dotadas de ordenhadeira mecânica de circuito fechado com sistema de pré-resfriamento em placas e refrigeração por tanque de expansão A contagem de microrganismos mesófilos foi realizada em Petrifilm ACTM e para a verificação da atividade proteolítica e/ou lipolítica utilizou-se ágar leite suplementado (9:1) com solução leite em pó desnatado reconstituído (1%) e ágar tributirina suplementado (99:1) com tributirina, respectivamente Para extração de DNA das cepas de mesófilos foi utilizada a técnica da fervura e para amplificação parcial do gene 16S rRNA utilizou-se a técnica de PCR, utilizando os primers 27F e 1492R Utilizou-se a análise de RFLP para definir os grupos genéticos entre as cepas isoladas e facilitar a escolha dos exemplares para sequenciamento A média da contagem de microrganismos mesófilos foi de 3,58 log UFC/mL A microbiota mesofílica com atividade proteolítica e /ou lipolítica foi identificada através da amplificação e sequenciamento do gene 16S rRNA Todas as cepas foram identificadas com percentual de identidade de 1% a partir da comparação com dados dos GenBank Diante disso, selecionou-se 172 cepas, as quais apresentaram capacidade proteolítica e/ou lipolítica, onde 66 (38%) cepas apresentaram atividade proteolítica, 57 (33%) ambas atividades e (49) 29% apenas atividade lipolítica Bactérias Gram-positivas corresponderam 83,72% do total de cepas e 16,28% foram Gram-negativas A identificação genética das cepas mesofílicas com capacidade deteriorante mostrou predominância dos gêneros Lactococcus e Enterococcus (4,11%), seguida por Staphylococcus sp (13,94%); Streptococcus sp (13,36%), Acinetobacter sp (11,62%), Kurthia sp e Bacillus sp (5,23%), Rothia sp (4,6%) e Stenotrophomonas (1,16%) Em relação a atividade deteriorante os gêneros Lactococcus e Enterococcus apresentaram entre os isolados, maior atividade proteolítica enquanto que o Streptococcus dysgalactae apresentou maior atividade lipolítica Os gêneros Rothia sp e Kurthia sp foram isoladas pela primeira vez como deteriorantes do leite cru
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Palavras-chave
Leite, Microbiologia, Leite, Resfriamento, Leite, Milk, Milk, Bacterial genetics, Cooling, Microbiology