Avaliação do antígeno recombinante ROP2 do Toxoplasma gondii no ensaio imunoenzimático para detecção de anticorpos IgG e IgM em soro humano

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dc.contributor.advisorNavarro, Italmar Teodorico
dc.contributor.authorPagliari, Sthefany
dc.contributor.bancaBreganó, Regina Mitsuka
dc.contributor.bancaMori, Fabiana Maria Ruiz Lopes
dc.contributor.coadvisorReiche, Edna Maria Vissoci
dc.coverage.extent57 p.
dc.coverage.spatialLondrina
dc.date.accessioned2024-09-23T11:21:17Z
dc.date.available2024-09-23T11:21:17Z
dc.date.issued2013-07-13
dc.description.abstractO Toxoplasma gondii é um parasito intracelular obrigatório de distribuição mundial que possui a capacidade de invadir uma enorme variedade de hospedeiros tendo os Felídeos como hospedeiros definitivos. O homem pode adquirir a infecção por meio da ingestão de oocistos esporulados presentes no meio ambiente, ingestão de cistos teciduais e pela via transplacentária. A transmissão congênita ocorre quando a mãe se infecta pela primeira vez durante o período da gestação, na maioria das vezes apresenta-se assintomática e tem o diagnóstico da infecção confirmado por exames imunológicos para pesquisa de anticorpos específicos contra o T. gondii. A elevada sensibilidade dos métodos imunológicos disponíveis atualmente, como o enzimaimunoensaio de captura de IgM ou quimioluminescência, trouxe a realidade da presença de anticorpos IgM anti-T. gondii residuais, que pode levá-la à interpretação incorreta no diagnóstico final. Diante disso, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o emprego da proteína recombinante de roptrias ROP2 de T. gondii (rROP2) em um ensaio imunoenzimático (ELISA) indireto para a detecção de anticorpos específicos das classes IgM e IgG contra este antígeno em amostras de soro humano e comparar os resultados obtidos com o antígeno rROP2 aos obtidos com antígeno total solúvel do T. gondii (ELISA-STAg), na imunofluorescência indireta (IFI) e quimioluminescência (CMIA) . Foram avaliadas amostras de soro divididas em quatro grupos, de acordo com o perfil de anticorpos obtidos nos métodos de IFI e CMIA para detecção de IgG e IgM anti-T. gondii e avidez de IgG. No grupo I foram incluídas 72 amostras compatíveis com a fase aguda; no grupo II, 207 amostras compatíveis com fase crônica; grupo III, com 110 amostras de indivíduos não expostos ao T. gondii e grupo IV, com 21 amostras de pacientes com diagnóstico de outras doenças infecciosas ou autoimunes. Na detecção de anticorpos IgM anti-T. gondii pelo ELISA-rROP2 IgM, foi encontrada positividade de 94,3% (67/71) no grupo I e de 62,2% (99/159) em amostras do grupo II. Na detecção de anticorpos IgG anti-T. gondii pelo ELISA-rROP2, as amostras do grupo I apresentaram positividade de 72,2% (52/72) e as amostras do grupo II apresentaram 77,2% (122/158) de positividade. No ELISA-rROP2 IgG, apenas as amostras do grupo IV, com outras doenças não relacionadas ao T. gondii, foram discriminadas. Quando os resultados obtidos foram comparados com a CMIA, a ELISA rROP2 IgM apresentou 92,5% de sensibilidade e 38,3% de especificidade. Quando os resultados obtidos foram comparados com a IFI, o ELISA rROP2 IgG apresentou 75,6% de sensibilidade e 33,3% de especificidade e quando comparado com a CMIA, o ELISA rROP2 IgG apresentou 75,2% de sensibilidade e 32,9% de especificidade. O método de CMIA foi capaz de detectar um maior número de amostras com reatividade aos anticorpos IgG anti-T. gondii do que a IFI, apresentando sensibilidade de 99,2%, especificidade de 82,7% e concordância kappa de 0,86. Os resultados obtidos indicam que a CMIA mostrou -se capaz de caracterizar, de forma clara, as diferentes fases da infecção pelo T. gondii, sendo mais sensível que a IFI. Os resultados demonstraram que o ELISA-rROP2 fornece positividade para ambas as fases de infecção (aguda e crônica). No entanto, na determinação dos níveis de anticorpos IgM pelo ELISA-rROP2, observou-se uma diferença significativa nos níveis de IgM entre os grupos de amostras de infeção aguda versus crônica (p< 0,0001) e aguda versus negativo (p< 0,0001), demonstrando, portanto, uma maior afinidade por anticorpos pertencentes à fase aguda da infecção.
dc.description.abstractother1Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite whose distribution is worldwide. It has the capacity to invade an enourmous variety of hosts, and the felids are its definitive hosts. Humans can get infected through ingestion of environmental sporulated oocysts, ingestion of tissue cysts, and via the transplacental route. Congenital transmission occurs when the mother gets infected for the first time during pregnancy. Mostly, the pregnant remains asymptomatic and the infection diagnose can be confirmed by immunological tests which detect specific T. gondii antibodies. However, the high sensitivity of available immunological tests, such as IgM-capture enzyme linked immunoassay (ELISA) or chemilunescence (CMIA), leaded reality of the presence of residual IgM anti- T. gondii antibodies, which induce wrong interpretation at final diagnose. Given this situation, this study had as aim to assess the use of T. gondii ROP2 rhoptry recombinant proteins (rROP2) at an indirect ELISA for the detection of specific IgM and IgG antibodies against this antigen on human sera samples and to compare the results obtained with the ELISA- rROP2 with those obtained with soluble antigen of T. gondii (ELISA-STAg), IFI, and CMIA. Sera samples were divided into four groups according to the profile of antibodies obtained in the methods of IFI and CMIA for detection of IgG and IgM anti- T. Gondii and IgG avidity. Group I comprised 72 samples with the acute phase, group II consisted of 207 samples with chronic phase, group III comprised with 110 samples from individuals not exposed to T. gondii, and group IV, 21 samples from patients with other diseases infectious or autoimmune diseases. Regarding IgM antibody anti-T. gondii by ELISA-rROP2, the positivity was 94.3% (67/71) in the group I and 62.2% (99 /159) in the group II. . For the detection of IgG anti-T. gondii by ELISA-rROP2, the seropositivity was 72.2% (52/72) in the group I, and 77.2% (122/158) in the group II. In ELISA-rROP2 for IgG detection, only samples of group IV, with non T.gondii-associated diseases, were discriminated. When the results obtained for the detection of IgM using ELISA-rROP2 were compared with the CMIA, the sensitivity was 92.5% and the specificity was 38.3%. When the results for detection of IgG were compared with IFI, the ELISArROP2 showed 75.6% of sensitivity and 33.3% of specificity; and when compared to CMIA, ELISA-rROP2 showed 75.2% of sensitivity and 32.9% if specificity for IgG anti-T. gondii. The CMIA method was able to detect a larger number of positive IgG anti-T. gondii samples than IFI, with sensitivity of 99.2%, specificity of 82.7%, and kappa of 0.86. Results indicate that the CMIA is able to characterize clearly the different stages of T. gondii infection and is more sensitive than the IFI. Results showed that ELISA-rROP2 antigen was positive for both phases of infection (acute and chronic). However, in determining the levels of IgM by ELISA-rROP2, there was a significant difference in IgM levels between acute and chronic infection groups (p<0.0001), and between acute and negative groups (p< 0.0001), showing, therefore, a higher antibody affinity belonging to the acute than chronic phase of infection.
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/17685
dc.language.isopor
dc.relation.departamentCCA - Departamento de Clínicas Veterinárias
dc.relation.institutionnameUniversidade Estadual de Londrina - UEL
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Ciência Animal
dc.subjectT. gondii
dc.subjectDiagnóstico sorológico
dc.subjectRoptrias
dc.subjectAntígeno recombinante
dc.subjectROP2
dc.subject.capesCiências Agrárias - Medicina Veterinária
dc.subject.cnpqCiências Agrárias - Medicina Veterinária
dc.subject.keywordsT. gondii
dc.subject.keywordsSorodiagnosis
dc.subject.keywordsRhoptry
dc.subject.keywordsRecombinant antigen
dc.subject.keywordsROP2
dc.titleAvaliação do antígeno recombinante ROP2 do Toxoplasma gondii no ensaio imunoenzimático para detecção de anticorpos IgG e IgM em soro humano
dc.title.alternativeEvaluation of ROP2 recombinant antigen Toxoplasma gondii by enzyme immunoassay for detection of IgG and IgM antibodies in human serum
dc.typeDissertação
dcterms.educationLevelMestrado Acadêmico
dcterms.provenanceCentro de Ciências Agrárias

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