Desenvolvimento e aplicação de um método quimiluminescente para quantificação de GSH e peróxido de hidrogênio em amostras de pacientes com COVID-19 admitidos na UTI

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dc.contributor.advisorCecchini, Rubens
dc.contributor.authorCavalcanti, Liara Freitas
dc.contributor.bancaArmani, Alessandra Lourenço Cecchini
dc.contributor.bancaMarinello, Poliana Camila
dc.coverage.extent63 p.
dc.coverage.spatialLondrina
dc.date.accessioned2024-07-30T11:45:19Z
dc.date.available2024-07-30T11:45:19Z
dc.date.issued2021-07-19
dc.description.abstractO estresse oxidativo (EO) está possivelmente envolvido na patogênese da COVID-19, doença declarada como pandemia pela Organização Mundial da Saúde (OMS) em março de 2020. As concentrações de glutationa (GSH) e peróxido de hidrogênio (H2O2) são importantes indicativos de estresse oxidativo, e a dosagem dos mesmos pode elucidar os mecanismos pelos quais o SARS-CoV-2 (corona vírus) causa danos aos tecidos. A quantificação dessas moléculas é realizada por técnicas pouco sensíveis ou de alto custo e complexidade de execução. Desta forma, este trabalho teve como objetivo demonstrar o possível envolvimento do EO na COVID-19 através da quantificação de GSH em eritrócitos e H2O2 no plasma sanguíneo utilizando um método quimiluminescente altamente sensível e de baixo custo desenvolvido em nosso laboratório. O sistema luminol–ferricianeto foi escolhido para a reação quimiluminescente devido ao custo mínimo, fácil armazenamento dos reagentes e sua utilização de forma consistente para quantificação de dopamina na urina e ferro em amostras de água. A temperatura da reação, o pH e concentração dos reagentes, a precipitação de proteínas e diluição das amostras foram padronizados previamente para obtenção de resultados satisfatórios. As amostras foram obtidas de pacientes com COVID-19 admitidos na UTI do Hospital Universitário de Londrina. De forma geral, apenas uma amostra foi coletada de cada pacientes, mas, em alguns casos, uma segunda amostra foi coletada. Após as coletas, as amostras de ambas as coletas foram agrupadas, formando o grupo COVID, e as amostras da primeira coleta foram também analisadas de acordo com o desfecho clínico do paciente. O grupo controle foi formado por voluntários saudáveis recrutados no campus da Universidade Estadual de Londrina ou provenientes de um banco de dados. As concentrações de GSH no grupo COVID, no grupo óbito e alta foram similares a do grupo controle. Em contrapartida, os níveis de H2O2 apresentaram uma redução significativa de 10 vezes no grupo COVID, 3.7 vezes no grupo alta e 23 vezes no grupo óbito em relação ao controle. Além disso, a concentração de H2O2 foi 6 vezes menor no grupo óbito comparado ao grupo alta. Por fim, houve uma redução da atividade da catalase de 1.4 vezes em ambos os grupos: COVID e óbito, comparados ao controle. Conclui-se que houve uma boa linearidade do método proposto utilizando o luminol (10 µM) preparado em tampão carbonato de sódio (pH 9,5), e o ferricianeto de potássio (4,5 mM) a 21 – 24ºC e pode-se supor que o estresse oxidativo está envolvido na patogênese da COVID-19.
dc.description.abstractother1Oxidative stress (OS) is possibly involved in the pathogenesis of COVID-19, a disease declared as pandemic by Word Health Organization (WHO) in march 2020. The concentrations of glutathione (GSH) and hydrogen peroxide (H2O2) are important indicators of oxidative stress, and its dosages could elucidate the mechanisms which SARS-Cov-2 (corona virus) causes damages to tissues. The quantification of these molecules is performed by low sensitive or high cost and complex techniques. Thus, this work aimed to demonstrate the possible involvement of OS in COVID-19 through quantification of GSH in erythrocytes H2O2 in blood plasma using a chemiluminescence method highly sensitive and low cost developed in our laboratory. The luminol potassium ferricyanide system was chosen due to its low cost, easy storage of the reagents and its use consistently to quantify dopamine in urine and iron in water samples. Temperature of reaction, pH and concentration of reagents, protein precipitation and samples dilutions were standardized to obtained satisfactory results. The COVID-19 blood samples were obtained from patients admitted to the ICU from University Hospital of Londrina. In general, only one sample was obtained from each patient, however, in some cases, a second one was collected. After, the samples from both collections were grouped, forming the COVID group and the samples from first collection were also analyzed according to the clinical outcome of each patient. The control group consisted of healthy volunteers recruited in the Londrina State University campus or were from a database. GSH concentrations in COVID group, died and discharged groups were similar to control group. On the other hand, H2O2 levels showed a 10-fold reduction in COVID group, 3.7 in discharged group and 23 in died group compared to the control. Moreover, the concentration of H2O2 was 6 times lower in died group compared to discharged. Lastly, there was a 1.4-fold reduction in catalase activity in both COVID group and died group, compared to the control. We conclude that there was a good linearity of the proposed method using the luminol (10 µM) prepare in sodium carbonate buffer (pH 9.5) and the potassium ferricyanide (4.5 mM) at 21–24 ºC and we can assume that the OS is involved in the pathogenesis of COVID-19.
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/17100
dc.language.isopor
dc.relation.departamentCCB - Departamento de Biologia Geral
dc.relation.institutionnameUniversidade Estadual de Londrina - UEL
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Patologia Experimental
dc.subjectSARS-CoV-2
dc.subjectEstresse oxidativo
dc.subjectHemácia
dc.subjectLuminol
dc.subjectPlasma sanguíneo
dc.subjectPatologia experimental
dc.subjectCOVID-19
dc.subjectMétodo quimiluminescente
dc.subject.capesCiências da Saúde - Medicina
dc.subject.keywordsSARS-Cov-2
dc.subject.keywordsErythrocytes
dc.subject.keywordsLuminol
dc.subject.keywordsOxidative stress
dc.subject.keywordsBlood plasma
dc.subject.keywordsExperimental pathology
dc.subject.keywordsChemiluminescent method
dc.titleDesenvolvimento e aplicação de um método quimiluminescente para quantificação de GSH e peróxido de hidrogênio em amostras de pacientes com COVID-19 admitidos na UTI
dc.title.alternativeDevelopment and application of a chemiluminescent method to quantify GSH and hydrogen peroxide in COVID-19 patients’ samples admitted to the ICU
dc.typeDissertação
dcterms.educationLevelMestrado Acadêmico
dcterms.provenanceCentro de Ciências Biológicas

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