Produção direcionada de Di-Ramnolipídeo por cultivos de Pseudomonas aeruginosa PAO 1 e desenvolvimento de processo de purificação para obtenção de um único congênere
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Resumo: Ramnolipídeos (RL) são biossurfactantes constituídos por uma ou duas moléculas de ramnose polar, respectivamente mono e di-ramnolipídeo, ligada a ácidos graxos ß-hidroxilados, apolares, estrutura anfipática que lhes confere excelente propriedade tensoativa, detergente e emulsificante São produzidos por bactérias Pseudomas aeruginosa numa mistura heterogênea contendo diversos congêneres de mono e di- ramnolipídeo O principal congênere produzido, Di-RL Rha2C1C1 apresenta ação antibacteriana, antifúngica e cicatrizante, sendo atrativo para o desenvolvimento de produtos farmacológicos Sabe-se que sua estrutura química está intimamente relacionada à atividade biológica, assim, a obtenção do Rha2C1C1 de forma isolada é de suma importância para garantir sua ação e potencial terapêutico Contudo, a recuperação dessa biomolécula isolada ainda é um desafio, pois o processo de purificação de alto custo dificulta sua recuperação e aplicação Nesse contexto, o presente trabalho objetiva a produção direcionada de di-ramnolipídeos a partir de cultivo em fermentação submersa de P aeruginosa e desenvolvimento de processo viável e eficaz para purificação de um único congênere de interesse, Rha2C1C1 A produção de RL foi realizada por cultivo submerso de P aeruginosa PAO1 em meio de sais (MSM) em frascos Erlenmeyer de 25 mL contendo 125 mL de meio de cultivo incubados por 9 dias, 37 °C e 2 rpm Em seguida, realizou-se a extração líquido-líquido por clorofórmio/metanol para obtenção do extrato bruto concentrado, sendo obtidos 4,28 gramas do extrato bruto de RL por litro de meio cultivado Para o processo de purificação, visando a recuperação do congênere Rha2C1C1 foram realizadas: (1) cromatografia líquida de alta eficiência preparativa (CLAEP); (2) cromatografia em camada delgada preparativa (CCDP); (3) cromatografia flash; e (4) separação por cartucho de sílica A confirmação da presença de apenas um composto na amostra recuperada foi realizada por ressonância magnética nuclear de hidrogênio (1H RMN) As purificações por CLAEP, CCDP e flash foram ineficazes devido à presença de contaminantes no composto final, além de apresentarem maior dificuldade para realização e consumo elevado de solventes Por outro lado, a separação com cartucho de sílica confeccionado em laboratório apresentou alto rendimento, eficácia para a obtenção do Di-RL Rha2C1C1 isolado e consumo reduzido de solventes Ao final, foram recuperados 247 mg da biomolécula isolada com grau de pureza de 82% O método apresentou vantagens de simples execução, não oneroso e reduzido consumo de solventes orgânicos Conclui-se que o processo de purificação desenvolvido com cartucho de sílica para obtenção do congênere Rha2C1C1 foi realizado com êxito, sendo uma potencial alternativa para recuperação e aplicação da biomolécula em produtos farmacológicos
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Palavras-chave
Pseudomonas aeruginosa, Processo de purificação, Ramnolipídeo, Pseudomonas aeruginosa, Rhamnolipids, Purification process