Diagnóstico etiológico molecular de infecções genitais em fêmeas bovinas ocasionadas por Mollicutes dos gêneros Mycoplasma e Ureaplasma

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dataload.collectionmapped02 - Mestrado - Ciência Animalpt_BR
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dc.contributor.advisorAlfieri, Alice Fernandes [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorVoltarelli, Daniele Cristinapt_BR
dc.contributor.bancaPretto-Giordano, Lucienne Garciapt_BR
dc.contributor.bancaCosta, Marcio Carvalho dapt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T14:44:27Z
dc.date.available2024-05-01T14:44:27Z
dc.date.created2014.00pt_BR
dc.date.defesa30.07.2014pt_BR
dc.description.abstractResumo: A vulvovaginite granular (VVG) é uma infecção caracterizada pela presença de secreção, granulações e vesículas nas mucosas vaginal e vulvar descrita em fêmeas bovinas de várias partes do mundo Bactérias dos gêneros Mycoplasma spp e Ureaplasma diversum, que se caracterizam por serem fastidiosos e de difícil diagnóstico, são frequentemente descritos como os principais agentes etiológicos envolvidos nessa infecção O objetivo deste estudo foi desenvolver um sistema de diagnóstico molecular, constituído por uma PCR genérica seguida de uma nested-PCR, para a identificação de espécies bacterianas da classe Mollicutes em material biológico proveniente de animais com VVG Para a PCR genérica foram desenhados primers consensuais degenerados (MolliFw1 / MolliRv1) tendo como alvo uma região conservada denominada espaço intergênico (ITS) e parte dos genes ribossomais 16S e 23S do genoma dos Mollicutes Posteriormente, foram desenhados primers internos para reações individuais de nested-PCR específica para as espécies de M bovis (MybovisFw2 / MybovisRv2), M bovigenitalium (MygenitFw3 / MygenitRv3) e U diversum (UdivFw4 / UdivRv4) Para determinar a especificidade dos primers os produtos amplificados por meio de nested-PCR foram submetidos ao sequenciamento e análise da sequência de nucleotídeos O sistema de diagnóstico desenvolvido foi ainda avaliado frente a 31 amostras de swabs vaginais colhidos de vacas com vulvovaginite clínica, provenientes de três rebanhos sendo dois de corte dos estados de Minas Gerais (n=12) e Mato Grosso do Sul (n=11) e um leiteiro do estado do Paraná (n=8) Todas as 31 amostras foram previamente avaliadas quanto a presença de herpesvírus bovino - 1 por meio de semi nested-PCR e foram negativas Em 87,1% (27/31) das amostras avaliadas foram identificados pelo menos um dos micro-organismos investigados Infecções singulares e mistas ocorreram em 54,8% (17/31) e 32,2% (1/31) das amostras, respectivamente U diversum foi identificado em 83,8% (26/31) e o M bovigenitalium em 35,4% (11/31) das amostras analisadas Nenhum dos três rebanhos bovinos incluídos no estudo apresentou infecção singular por M bovis Os resultados obtidos nesse estudo sugerem a importância de U diversum e do M bovigenitalium na etiologia da VVG As taxas de positividade para Mycoplasma spp e U diversum obtidas foram semelhantes e/ou superiores aos resultados apresentados em estudos que incluíram como métodos de diagnóstico técnicas de cultivo bacteriológico e também reações moleculares como PCR e nested-PCR O sistema molecular de diagnóstico de infecções genitais em fêmeas bovinas ocasionadas por bactérias da classe Mollicutes revelou-se como uma alternativa viável, rápida, sensível e específica para o diagnóstico de M bovis, M bovigenitalium e U diversum a partir de material biológico O diagnóstico precoce dos três principais patógenos bacterianos envolvidos em infecções genitais em vacas com VVG é de grande importância, pois possibilita a implantação de medidas de tratamento, controle e profilaxia mais rápidas e efetivas das infecçõespt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Granular vulvovaginitis (GVV) is an infection characterized by the presence of vaginal granular discharge, and vesicles in vaginal and vulvar mucosa described in cows worldwide Bacteria of the genera Mycoplasma spp and Ureaplasma diversum are characterized by being fastidious and difficult to diagnose are frequently described as the main etiological agents involved in this infection The objective of this study was to develop a molecular diagnostic method, consisting of a generic PCR followed by a nested-PCR for identification of bacterial species of the Mollicutes class in biological material obtained from animals with GVV Degenerate primers were designed for generic consensus PCR (MolliFw1 / MolliRv1) targeting the conserved intergenic spacer region denominated ITS and part of the 16S and 23S ribosomal genes of Mollicutes Subsequently, internal primers were designed for individual nested-PCR reactions specific for the M bovis (MybovisFw2 / MybovisRv2), M bovigenitalium (MygenitFw3 / MygenitRv3) and U diversum (UdivFw4 / UdivRv4) species To determine the specificity of the primers, the nested-PCR amplified products were subjected to sequencing and nucleotides sequence analysis The diagnostic system developed was used to screening of 31 vaginal swabs collected from cows with clinical vulvovaginitis from three herds; two beef herds in Minas Gerais (n=12) and Mato Grosso do Sul (n=11) and one dairy herd of Paraná (n=8) state All 31 samples were negative for the presence of bovine herpesvirus - 1 by semi nested-PCR At least one of the microorganisms investigated was present in 871% (27/31) samples Single and mixed infections occurred in 548% (17/31) and 322% (1/31) of sample, respectively U diversum was identified in 83,8% (26/31) and M bovigenitalium in 354% (11/31) of samples None of the three herds included in the study showed M bovis single infection The results of this study suggest the importance of U diversum and M bovigenitalium in the etiology of GVV The positivity rates for Mycoplasma spp and U diversum reported here were similar or higher than the results of previous studies usin diagnostic methods such as bacterial culture and molecular techniques including PCR and nested-PCR The molecular tools for diagnosis of genital infections in cows caused by bacteria of the class Mollicutes revealed itself as a reliable, rapid, sensitive and specific alternative for the diagnosis of M bovis, M bovigenitalium and U diversum from biological material Early diagnosis of the three major bacterial pathogens involved in genital infections in cows with GVV is of major importance, because it enables the implementation of more effective measures of treatment, control and prophylaxis of infectionspt_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Ciência Animal) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animalpt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/15009
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenameCiência Animalpt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Agráriaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-graduação em Ciência Animalpt_BR
dc.subjectVacapt_BR
dc.subjectDoençaspt_BR
dc.subjectVulvovaginitept_BR
dc.subjectDiagnóstico molecularpt_BR
dc.subjectBovinopt_BR
dc.subjectDiseasespt_BR
dc.subjectMolecular diagnosispt_BR
dc.subjectCattlept_BR
dc.subjectVulvovaginitis - Generative organs - Cowpt_BR
dc.subjectInfectionspt_BR
dc.titleDiagnóstico etiológico molecular de infecções genitais em fêmeas bovinas ocasionadas por Mollicutes dos gêneros Mycoplasma e Ureaplasmapt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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