Diagnóstico etiológico molecular de infecções genitais em fêmeas bovinas ocasionadas por Mollicutes dos gêneros Mycoplasma e Ureaplasma
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Voltarelli, Daniele Cristina
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Resumo
Resumo: A vulvovaginite granular (VVG) é uma infecção caracterizada pela presença de secreção, granulações e vesículas nas mucosas vaginal e vulvar descrita em fêmeas bovinas de várias partes do mundo Bactérias dos gêneros Mycoplasma spp e Ureaplasma diversum, que se caracterizam por serem fastidiosos e de difícil diagnóstico, são frequentemente descritos como os principais agentes etiológicos envolvidos nessa infecção O objetivo deste estudo foi desenvolver um sistema de diagnóstico molecular, constituído por uma PCR genérica seguida de uma nested-PCR, para a identificação de espécies bacterianas da classe Mollicutes em material biológico proveniente de animais com VVG Para a PCR genérica foram desenhados primers consensuais degenerados (MolliFw1 / MolliRv1) tendo como alvo uma região conservada denominada espaço intergênico (ITS) e parte dos genes ribossomais 16S e 23S do genoma dos Mollicutes Posteriormente, foram desenhados primers internos para reações individuais de nested-PCR específica para as espécies de M bovis (MybovisFw2 / MybovisRv2), M bovigenitalium (MygenitFw3 / MygenitRv3) e U diversum (UdivFw4 / UdivRv4) Para determinar a especificidade dos primers os produtos amplificados por meio de nested-PCR foram submetidos ao sequenciamento e análise da sequência de nucleotídeos O sistema de diagnóstico desenvolvido foi ainda avaliado frente a 31 amostras de swabs vaginais colhidos de vacas com vulvovaginite clínica, provenientes de três rebanhos sendo dois de corte dos estados de Minas Gerais (n=12) e Mato Grosso do Sul (n=11) e um leiteiro do estado do Paraná (n=8) Todas as 31 amostras foram previamente avaliadas quanto a presença de herpesvírus bovino - 1 por meio de semi nested-PCR e foram negativas Em 87,1% (27/31) das amostras avaliadas foram identificados pelo menos um dos micro-organismos investigados Infecções singulares e mistas ocorreram em 54,8% (17/31) e 32,2% (1/31) das amostras, respectivamente U diversum foi identificado em 83,8% (26/31) e o M bovigenitalium em 35,4% (11/31) das amostras analisadas Nenhum dos três rebanhos bovinos incluídos no estudo apresentou infecção singular por M bovis Os resultados obtidos nesse estudo sugerem a importância de U diversum e do M bovigenitalium na etiologia da VVG As taxas de positividade para Mycoplasma spp e U diversum obtidas foram semelhantes e/ou superiores aos resultados apresentados em estudos que incluíram como métodos de diagnóstico técnicas de cultivo bacteriológico e também reações moleculares como PCR e nested-PCR O sistema molecular de diagnóstico de infecções genitais em fêmeas bovinas ocasionadas por bactérias da classe Mollicutes revelou-se como uma alternativa viável, rápida, sensível e específica para o diagnóstico de M bovis, M bovigenitalium e U diversum a partir de material biológico O diagnóstico precoce dos três principais patógenos bacterianos envolvidos em infecções genitais em vacas com VVG é de grande importância, pois possibilita a implantação de medidas de tratamento, controle e profilaxia mais rápidas e efetivas das infecções
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Palavras-chave
Vaca, Doenças, Vulvovaginite, Diagnóstico molecular, Bovino, Diseases, Molecular diagnosis, Cattle, Vulvovaginitis - Generative organs - Cow, Infections