Efeito da suplementação com antioxidantes no cultivo in vitro de folículos ovarianos pré-antrais de fêmeas Bos taurus indicus
Data
2021-02-19
Autores
Bergamo, Larissa Zamparone
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Editor
Universidade Estadual de Londrina
Resumo
Resumo: A adição de antioxidantes no meio de cultivo in vitro de folículos ovarianos préantrais bovinos contribui para o adequado desenvolvimento dos folículos, para a manutenção da integridade folicular e do estresse oxidativo. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da suplementação com antioxidantes no desenvolvimento e na manutenção da integridade folicular e do estresse oxidativo no cultivo in vitro de folículos ovarianos pré-antrais de fêmeas Bos taurus indicus. Para a realização do experimento A (Ácido Ascórbico) e do experimento B (Ácido Alfa Lipóico), ovários (n=20 e n=24, respectivamente) obtidos em abatedouro foram fragmentados e um fragmento, escolhido aleatoriamente de cada par de ovário, foi fixado em Bouin (controle não cultivado; D0). Esses fragmentos foram destinados para análise da morfologia e do crescimento folicular (histologia clássica). Um fragmento, escolhido aleatoriamente de cada par de ovário, foi congelado a -80º C (controle não cultivado; D0), para análise do estresse oxidativo (TBARS, NBT e FRAP). Os demais fragmentos foram cultivados in vitro por 6 (D6) ou 12 (D12) dias, em Meio Essencial Mínimo (MEM+) ou MEM+ suplementado com Ácido Ascórbico (50 ou 100 ng/mL) ou Ácido Alfa Lipóico (50, 100 ou 250 ng/mL), com uma matriz extracelular de gel de agarose, em estufa a 38,5º C, com ar e umidade saturada. A cada dois dias, realizou-se a troca total do meio de cultivo por meio fresco. Diferenças entre as proporções de folículos primordiais e em desenvolvimento (primário e secundário), para cada tratamento (controle não cultivado, controle cultivado e diferentes concentrações de antioxidantes testadas nos diferentes tempos), foram analisadas pelo teste de Qui-quadrado e/ou teste Exato de Fisher. Na ocorrência de um efeito significativo, as proporções foram comparadas por um teste de proporção 2x2 para se estabelecer o ranking entre os tratamentos. Os dados das análises de estresse oxidativo foram submetidos à ANOVA seguido pelo teste de Bonferroni. Os valores foram considerados significativos quando p ≤ 0,05. No experimento A, a suplementação com 100 ng/mL (33,56%; 49/146; p < 0,0001) de Ácido Ascórbico no meio de cultivo in vitro de folículos ovarianos pré-antrais, após 6 dias de cultivo, foi a mais eficiente em promover o desenvolvimento, manter a integridade folicular e os níveis de espécies reativas de oxigênio (EROs) estáveis. No experimento B, a suplementação com 100 ng/mL (36,88%; 52/141; p < 0,0001) de Ácido Alfa Lipóico, aos 6 dias de cultivo in vitro foi a mais eficiente em promover o desenvolvimento, manter a integridade folicular e os níveis de EROs estáveis. Conclui-se que os folículos ovarianos pré-antrais inclusos em fragmentos ovarianos bovinos, provenientes de abatedouro, podem ser cultivados in vitro ao longo de 6 dias, com meio suplementado com antioxidantes, o que permite o desenvolvimento e a manutenção da integridade folicular e níveis de espécies reativas de oxigênio estáveis.
Descrição
Palavras-chave
Ácido alfa lipóico, Ácido ascórbico, Estresse oxidativo, Foliculogênese