Avaliação da imunidade protetora em frangos de corte vacinados com proteína recombinante rHsp70 de Eimeria tenella
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Bogado, Alexey Leon Gomel
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Resumo
Resumo: A epidemiologia da coccidiose aviária caracteriza-se por uma grande disseminação de oocistos no meio ambiente, podendo ocorrer significantes prejuízos em granjas com aves infectadas, fazendo-se necessárias, portanto, medidas profiláticas para o seu controle Estas medidas são realizadas principalmente com o uso de anticoccídicos adicionados à ração No entanto, o manejo incorreto e a falta de critérios definidos para o uso dessas drogas têm gerado sérios problemas de resistência Somando-se a esse quadro, existe a pressão do mercado consumidor para banir drogas da alimentação animal Pesquisas que visam à obtenção de vacinas para o controle da coccidiose são realizadas com a finalidade de buscar alternativas frente à quimioterapia usual O objetivo do presente estudo foi clonar e expressar o gene HSP7 de E tenella em Escherichia coli, bem como, imunizar frangos de corte e avaliar a imunidade protetora Para isso 8 aves da linhagem Cobb, machos e fêmeas, com um dia de idade, foram alojadas em baterias metálicas com fornecimento de ração e água ad libitum, as quais foram distribuídas em quatro grupos (G1, G2, G3, e G4) com 2 aves cada No sétimo dia do experimento os animais foram separados e os tratamentos realizados como segue: G1 – aves vacinadas com a proteína rHSP7 associada ao adjuvante (Quil-A, 5?g), G2 – aves não imunizadas e não desafiadas, G3 – aves não imunizadas e desafiadas e G4 – aves inoculadas com adjuvante Quil A (5?g) Foram realizadas duas doses da vacina via sub-cutânea, com 15 e 5?g nos dias 7 e 14, respectivamente O mesmo foi realizado no G1 e G4 com PBS No dia 24 foi feito o desafio com 5,x14 oocistos de Eimeria tenella em todos os grupos, exceto o G2 Para a clonagem foi realizada a extração do RNA total dos esporozoítos pelo reagente TRIzol® de acordo com as instruções do fabricante O cDNA foi obtido a partir do de 1 µg de RNA total através do kit de Protoscript® M-MuLV Os oligonucleotídeos iniciadores específicos para o gene HSP7 foram confeccionados a partir da sequência Z46965 depositada no Genbank Em seguida, os fragmentos de DNA necessários para a clonagem foram obtidos pela técnica de reação em cadeia pela polimerase (PCR), utilizando os oligonucleotídeos acima citados A clonagem dos genes foi realizada no vetor pTrcHis2 TOPO® (Invitrogen, USA) Após a clonagem em bactérias E coli, a proteína foi expressada e apresentou um tamanho de 23kDa, com rendimento de 5mg/L Quando avaliado a imunidade protetora, a eliminação de oocistos apresentou diferença significativa entre os tratamentos, sendo que a taxa de aumento da fecundidade dos oocistos do grupo vacinado com rHSP7 foi 66% maior em relação aos grupos controles desafiados Não houve diferença entre os tratamentos para o ganho de peso e escore de lesão O título de anticorpos dos dias 24 e 31 do grupo vacinado com rHSP7 apresentou uma densidade óptica pelo menos duas vezes maior em relação aos grupos controles desafiados A concentração de luteína plasmática do grupo vacinado não diferiu do grupo controle não desafiado Com base nos resultados obtidos, conclui-se que a proteína rHSP7 promoveu um aumento da fecundidade dos oocistos e a concentração de luteína plasmáticas manteve-se nos mesmos níveis das aves não desafiadas, indicando uma proteção parcial contra o desafio realizado
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Palavras-chave
Imunologia veterinária, Frango de corte, Parasito, Coccidiose em ave, Parasitologia veterinária, Coccidiosis, Molecular cloning, Veterinary immunology