Localização diferencial de um antígeno codificado pelo gene Tc8.2 de Trypanosoma cruzi
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Kian, Danielle
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Resumo
Resumo: Trypanosoma cruzi é um parasito que exibe formas de vida com diferenças morfológicas e funcionais, alternando entre formas replicativas (epimastigota e amastigota) e infectantes (tripomastigota) De fato, a expressão gênica é a chave dessas diferenças Ao contrário de outros eucariotos, as sequências que codificam proteínas estão organizadas em unidades de transcrição policistrônicas, que são convertidos em RNAm monocistrônicos por trans splicing no terminal 5' e poliadenilação na extremidade 3' do transcrito primário Embora trans splicing seja um mecanismo preciso, existem casos em que são utilizados mais de um local aceptor de splicing no interior de uma região intergênica, podendo, portanto, gerar diferentes proteínas a partir de um mesmo gene, ou seja, ocorre um processamento alternativo do transcrito Aqui, nós descrevemos o gene Tc82, que foi isolado de uma biblioteca de cDNA de formas tripomastigota em vetor lambda Zap A sequência desse gene foi analisada em bancos de dados e a região C terminal foi clonada e expressa em sistema Gateway O soro obtido da imunização de camundongos com a proteína recombinante foi utilizado para reagir com extratos proteicos de T cruzi e houve o reconhecimento de polipeptídios de 7 kDa nas formas epimastigotas e de 8 kDa nas formas tripomastigotas Além disso, pôde ser observada uma imunolocalização diferencial da proteína Tc82 nestas duas formas Na forma epimastigota a proteína foi encontrada distribuída em todo citoplasma, enquanto que em tripomastigota essa distribuição ocorreu no núcleo e cinetoplasto Estes resultados sugerem que as proteínas derivadas do gene Tc82 têm funções diferentes e possam estar relacionadas com a fase de desenvolvimento do parasito Para caracterizar esse gene, foi realizado ensaios de Southern blot, indicando que se trata de um gene único ou em poucas cópias e o Northern blot havendo o reconhecimento de transcritos de tamanhos diferentes nas três formas de vida de T cruzi (4,4 kb em epimastigotas e amastigotas e 3, kb em tripomastigotas), o que sugere a ocorrência de splicing alternativo na formação do RNA do gene Tc82
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Palavras-chave
Tripanossoma cruzi, Antigenos parasitários, Genes, Sequência de Nucleotídeos, Genética, Parasite antigens, Genes, Genes, Expression, Sequence, nucleotide