Otimização de PCR tradicional e em tempo real para detecção de Campylobacter spp. e Salmonella spp. em alimentos
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Alves, Juliane
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Resumo
Resumo: Salmonella spp e Campylobacter spp são as causas mais frequentes de doenças bacterianas transmitidas por alimentos no mundo O monitoramento dessas bactérias em alimentos é essencial para o controle da doença humana Os métodos convencionais de isolamento de Campylobacter e Salmonella em alimentos podem requerer de quatro a dez dias para a conclusão dos resultados A reação em cadeia da polimerase (PCR) é empregada na área de alimentos devido a sua rapidez e especificidade na detecção de patógenos Embora vários kits comerciais estejam disponíveis, o seu alto custo dificulta o uso nos laboratórios de diagnóstico e controle de qualidade, principalmente em países em desenvolvimento como o Brasil A otimização de ensaios moleculares específicos e, principalmente, a detecção simultânea dessas duas bactérias patogênicas vem de encontro à necessidade desses laboratórios O objetivo deste trabalho foi otimizar ensaios de PCR e extração de DNA para a detecção de Salmonella spp e Campylobacter spp em diferentes matrizes alimentares Nas reações otimizadas utilizou-se o par de iniciadores Styinva-JHO, específico para Salmonella spp, que gerou um amplicom de 119 pares de bases O par de iniciadores específico para Campylobacter spp foi OT1559 e 18-1 gerando um amplicom de 287 pares de bases A especificidade dos ensaios PCR otimizados foi de 1% e a sensibilidade foi de 1 UFC de Campylobacter ou Salmonella por mililitro da enxaguadura das diferentes amostras de alimentos testadas, após etapa de enriquecimento A prevalência de Campylobacter spp, nas análises feitas em amostras de cortes de frango, foi de 6,9% (64/15) C jejuni foi identificada em 28,1% (18/64) das amostras positivas para Campylobacter spp e C coli foi identificada na mesma proporção 28,1% (18/64) C jejuni e C coli foram identificadas simultaneamente em 12,5% (8/64) das amostras Os ensaios PCR e as técnicas de extração de DNA otimizadas neste trabalho são uma alternativa rápida, barata e eficiente para detecção de Samonella spp e Campylobacter spp em alimentos, após o enriquecimento A redução do tempo de análise e a eficiência na detecção destes patógenos são de grande importância para laboratórios de análises de alimentos na identificação do alimento contaminado e origem do surto
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Palavras-chave
Alimentos, Microbiologia, Reação em cadeia de polimerase, Bactérias patogênicas, Salmonela, Food, Polymerase chain reaction, Pathogenic bacteria, Salmonella, Poultry as food - Diseases, Microbiology