Obtenção, seleção de eventos de soja contendo o gene AtAREB1 e análises da sinalização ABA-Dependente
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Barbosa, Elton Gargioni Grisoste
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Resumo
Resumo: Nos últimos anos, o Brasil tem estado à frente de inúmeros progressos científicos, gerando crescimento não somente no setor tecnológico, mas por extensão, também no setor econômico Com a produção de soja como carro-chefe no agronegócio brasileiro, é imprescindível que estratégias de engenharia genética voltadas para tolerância à estresses abióticos como a seca estejam entre os principais investimentos dentro da ciência e tecnologia nacional Atualmente, o desenvolvimento de plantas geneticamente modificadas (PGMs) tem focado suas estratégias na introdução de fatores de transcrição (FT) que controlam inúmeros genes estresse-induzidos O gene AREB1 é um FT com domínio bZIP e está relacionado à cascata ABA-dependente sob déficit hídrico O objetivo do presente estudo foi obter plantas de soja geneticamente modificadas com a construção pBI35SO:AtAREB1 (35S:AREB1) e caracterizar os eventos obtidos via Southern blot e RT-qPCR quanto ao número de cópias e expressão relativa do transgene em condições controle, além da segregação para a geração T1 Com base nos resultados obtidos, três eventos candidatos foram escolhidos para estudos posteriores relacionados à tolerância ao estresse hídrico em experimentos a serem conduzidos em casa de vegetação Este é o primeiro estudo reportando a modificação genética de soja com esta construção A eficiência de transformação obtida foi de ,75% (12 eventos positivos/1583 embriões transformados) De um total de oito eventos confirmados como positivos e não quiméricos, foram selecionados os candidatos A24, A2889 e A257, com uma ou duas, três e inúmeras cópias, respectivamente, e diferentes expressões relativas do transgene entre si Adicionalmente, uma derivação da fórmula empregada normalmente para metodologias de quantificação de número de cópias por RT-qPCR também foi utilizada, onde é descartado o uso de um evento previamente caracterizado com o gene de interesse como calibrador, utilizando-se assim o próprio gene de referência endógena através da fórmula 2-?Ct Os resultados foram coerentes pela comparação com métodos mais tradicionais como o Southern blot Conclui-se que a introdução da construção 35S:AREB1 em soja via biobalística originou eventos estáveis e com poucas cópias do transgene, constituindo-se em um importante passo não somente para o entendimento dessa via de sinalização ABA-dependente, mas também para desenvolver estratégias eficazes e sistêmicas à curto/médio prazo na obtenção de plantas tolerantes ao déficit hídrico
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Palavras-chave
Soja, Melhoramento genético, Soja, Condições hídricas, Genética, Breeding, Expression, Transgenic plants, Crop biotechnology, Water deficiency, Genes, Soybean