Estudos etiológicos da mancha branca do milho e identificação de hospedeiros alternativos de Pantoea ananatis
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Gonçalves, Ricardo Marcelo
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Resumo
Resumo: A doença mancha branca do milho (MBM) é alvo de divergências com relação à sua etiologia Alguns autores descrevem o fungo Phaeospharia maydis (forma anamórfica Phyllosticta sp, sinonímia Phoma sp) como agente etiológico da doença, outros a bactéria Pantoea ananatis e ainda há autores que relatam a existência de diferentes agentes causais da doença, como Phyllosticta sp, o Phoma sorghina e a Sporormiella sp, e que dependendo do local, um ou outro fungo poderia ser o agente causal da doença Desta forma, um dos objetivos deste trabalho foi determinar a etiologia da doença e avaliar a possibilidade de duas espécies de gramíneas do gênero Digitaria serem hospedeiros alternativos de P ananatis Plantas de milho híbrido HS2 cultivadas em casa de vegetação (CV) foram inoculadas com P ananatis 45 dias após a semeadura Sintomas típicos da doença MBM foram observados 1 dias após a inoculação As plantas permaneceram na CV até as lesões evoluírem para o estádio necrótico quando procedeu-se a coleta das folhas contendo as lesões Também foram coletadas à campo, folhas contendo lesões necróticas resultantes de infecção natural Muitas das lesões necróticas, tanto aquelas obtidas por infecção natural, como aquelas obtidas por inoculação em CV apresentaram estruturas fúngicas em seu interior As folhas foram lavadas e segmentos foliares apresentando lesões com estruturas fúngicas foram acondicionados em câmara úmida Os fungos foram isolados, purificados e a técnica da PCR foi usada para amplificar o espaço interno transcrito (ITS) do rDNA Os amplicons foram sequenciados e a identificação dos isolados foi realizada pelo grau de similaridade das sequências com àquelas depositadas no GenBank Os fungos isolados tanto de lesões necróticas obtidas pela inoculação de P ananatis em CV como aquelas coletadas à campo foram identificados como pertencentes às espécies Epicoccum nigrum, Leptosphaerulina chartarum, Fusarium chlamydosporum, Alternaria alternata, Alternaria ricini, Fusarium equiseti, Gibberella moniliformis (Fusarium moniliforme), Curvularia sp, Phoma sp (sinonímia de várias espécies de Phyllosticta sp) e Phoma sorghina Para fornecer maior subsídio com relação à etiologia da MBM, também foi realizado o monitoramento das lesões em diferentes estádios de desenvolvimento Para tanto, lesões de MBM obtidas por meio de infecção natural foram coletadas a campo, classificadas em quatro estádios diferentes de desenvolvimento, de acordo com o progresso da lesão, e o DNA total extraído de um pool de lesões para cada estádio Após extração, o DNA foi amplificado por PCR com primers específicos para P ananatis (ANAF/ANAR) e primers universais para fungos (ITS) P ananatis foi identificada em todos os estádios de desenvolvimento das lesões, enquanto que fungos foram detectados somente nos tecidos necróticos das lesões Os experimentos comprovaram que a bactéria P ananatis é o agente causal da MBM, e que os fungos instalam-se nas lesões preestabelecidas pela bactéria A ocorrência de hospedeiros alternativos de P ananatis foi analisada por meio de inoculações cruzadas realizadas em casa de vegetação entre os isolados: WT-2 (P ananatis controle positivo, isolado da MBM); Pa2DH (isolado obtido de lesões de MBM, o qual foi inoculado e reisolado a partir de lesões de Digitaria horizontalis) e Pa1DI (isolado de Digitaria insularis) A partir dos sintomas obtidos, os reisolados foram empregados em sucessivas inoculações Sintomas da doença foram observados em casa de vegetação 1 e 3 dias após as inoculações em plantas de Digitaria spp e milho, respectivamente A bactéria foi reisolada após os testes de patogenicidade e todos os reisolados foram identificados como P ananatis por meio do sequenciamento parcial do gene 16S rDNA e dos amplicons com os primers específicos ANAF/ANAR
Descrição
Palavras-chave
Milho, Doenças e pragas, Bactérias fitopatogênicas, Plantas hospedeiras, Corn, Diseases and pests, Phytopathogenic bacteria, Host plants