Estudos etiológicos da mancha branca do milho e identificação de hospedeiros alternativos de Pantoea ananatis

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dc.contributor.advisorPaccola-Meirelles, Luzia Doretto [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorGonçalves, Ricardo Marcelopt_BR
dc.contributor.bancaLeite Junior, Rui Pereirapt_BR
dc.contributor.bancaCanteri, Marcelo Giovanettipt_BR
dc.contributor.coadvisorFigueiredo, José Edson Fontes [Coorientador]pt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T13:46:18Z
dc.date.available2024-05-01T13:46:18Z
dc.date.created2012.00pt_BR
dc.date.defesa28.02.2012pt_BR
dc.description.abstractResumo: A doença mancha branca do milho (MBM) é alvo de divergências com relação à sua etiologia Alguns autores descrevem o fungo Phaeospharia maydis (forma anamórfica Phyllosticta sp, sinonímia Phoma sp) como agente etiológico da doença, outros a bactéria Pantoea ananatis e ainda há autores que relatam a existência de diferentes agentes causais da doença, como Phyllosticta sp, o Phoma sorghina e a Sporormiella sp, e que dependendo do local, um ou outro fungo poderia ser o agente causal da doença Desta forma, um dos objetivos deste trabalho foi determinar a etiologia da doença e avaliar a possibilidade de duas espécies de gramíneas do gênero Digitaria serem hospedeiros alternativos de P ananatis Plantas de milho híbrido HS2 cultivadas em casa de vegetação (CV) foram inoculadas com P ananatis 45 dias após a semeadura Sintomas típicos da doença MBM foram observados 1 dias após a inoculação As plantas permaneceram na CV até as lesões evoluírem para o estádio necrótico quando procedeu-se a coleta das folhas contendo as lesões Também foram coletadas à campo, folhas contendo lesões necróticas resultantes de infecção natural Muitas das lesões necróticas, tanto aquelas obtidas por infecção natural, como aquelas obtidas por inoculação em CV apresentaram estruturas fúngicas em seu interior As folhas foram lavadas e segmentos foliares apresentando lesões com estruturas fúngicas foram acondicionados em câmara úmida Os fungos foram isolados, purificados e a técnica da PCR foi usada para amplificar o espaço interno transcrito (ITS) do rDNA Os amplicons foram sequenciados e a identificação dos isolados foi realizada pelo grau de similaridade das sequências com àquelas depositadas no GenBank Os fungos isolados tanto de lesões necróticas obtidas pela inoculação de P ananatis em CV como aquelas coletadas à campo foram identificados como pertencentes às espécies Epicoccum nigrum, Leptosphaerulina chartarum, Fusarium chlamydosporum, Alternaria alternata, Alternaria ricini, Fusarium equiseti, Gibberella moniliformis (Fusarium moniliforme), Curvularia sp, Phoma sp (sinonímia de várias espécies de Phyllosticta sp) e Phoma sorghina Para fornecer maior subsídio com relação à etiologia da MBM, também foi realizado o monitoramento das lesões em diferentes estádios de desenvolvimento Para tanto, lesões de MBM obtidas por meio de infecção natural foram coletadas a campo, classificadas em quatro estádios diferentes de desenvolvimento, de acordo com o progresso da lesão, e o DNA total extraído de um pool de lesões para cada estádio Após extração, o DNA foi amplificado por PCR com primers específicos para P ananatis (ANAF/ANAR) e primers universais para fungos (ITS) P ananatis foi identificada em todos os estádios de desenvolvimento das lesões, enquanto que fungos foram detectados somente nos tecidos necróticos das lesões Os experimentos comprovaram que a bactéria P ananatis é o agente causal da MBM, e que os fungos instalam-se nas lesões preestabelecidas pela bactéria A ocorrência de hospedeiros alternativos de P ananatis foi analisada por meio de inoculações cruzadas realizadas em casa de vegetação entre os isolados: WT-2 (P ananatis controle positivo, isolado da MBM); Pa2DH (isolado obtido de lesões de MBM, o qual foi inoculado e reisolado a partir de lesões de Digitaria horizontalis) e Pa1DI (isolado de Digitaria insularis) A partir dos sintomas obtidos, os reisolados foram empregados em sucessivas inoculações Sintomas da doença foram observados em casa de vegetação 1 e 3 dias após as inoculações em plantas de Digitaria spp e milho, respectivamente A bactéria foi reisolada após os testes de patogenicidade e todos os reisolados foram identificados como P ananatis por meio do sequenciamento parcial do gene 16S rDNA e dos amplicons com os primers específicos ANAF/ANARpt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: The maize white spot (MWS) disease is largely studed due to the divergence related to its etiology Some researchers describe the fungus Phaeospharia maydis (anamorphic form of Phyllosticta sp, synonymy Phoma sp) as the causal agent, and some the bacteria Pantoea ananatis and yet another researchers who report the existence of different causative agents of disease, Phyllosticta sp, Phoma sorghina and Sporormiella sp, that depending on location, either fungus could be the causal agent of disease By this mean one of the goals of this work was to confirm the etiology of MWS Another goal of this work was to evaluate the possibility of two grass species from Digitaria genus to be optional hosts for P ananatis Hybrid maize plants HS2 were grown in a greenhouse and inoculated with P ananatis 45 days after planting Characteristic symptons were observed 1 days after the inoculation The plants were held at the greenhouse until the injuries have developed to the necrotic stage, when the leaves with the injuries were collected Leaves were also collected at field condition, containing necrotic injuries, caused by natural infection Many of the necrotic injuries, no matter if obtained by natural infection or by the inoculation at the green house, have shown fungi structures in its interior The leaves were washed and sections showing injuries with central fungi structures were packed into a moist chaimber The fungi were then isolates, purified and the PCR technique was used to amplify the internal transcribed spacer (ITS) of rDNA The amplicons were sequenced and the identification of the fungi isolates was performed by the similarity degree of the sequencies with those deposited at GenBank The fungi isolates, both from the necrotic injuries acquired by the inoculation of P ananatis in greenhouse and those collected at field conditions were identified as belonging to the species Epicoccum nigrum, Leptosphaerulina chartarum, Fusarium chlamydosporum, Alternaria alternata, Alternaria ricini, Fusarium equiseti, Gibberella moniliformis (Fusarium moniliforme), Curvularia sp, Phoma sp (synonymy of many species of Phyllosticta sp) and Phoma sorghina To provide more subsidy relationed to the etiology of MWS, also the monitoring of the injuries in diferente degrees of development For this, injuries of MWS were obtained at field condition by natural infection, classified in four different development stages, according to the injury development, and the total DNA was extracted from an injury pool for each stage After the extraction, the DNA was amplified by a PCR with specific primers for P ananatis (ANAF/ANAR) and the universal primers for fungi (ITS) P ananatis is present in every stage of the injury development, when the fungi were detected after the injury tissue becomes necrotic So these experiments proved to be the bacterium P ananatis the causal agent of MWS, and fungi install itself in the injures pre-established by the P ananatis bacteria The incidence of optional hosts for P ananatis was analised through crossed inoculations, taken in a greenhouse between the isolates: WT-2 (P ananatis positive control, isolated from MWS), Pa2DH (isolate taken from MWS injuries, which was inoculated and reisolated from Digitaria horizontalis injuries) and Pa1DI (isolated from Digitaria insularis) From the gotten symptons, the reisolate were used in subsequent inoculations Disease symptons were observed in greenhouse condition between 1 and 3 days after inoculation in Digitaria and maize plants, respectively The bacteria was reisolated after pathogenicity tests and all of the reisolated were identified as P ananatis by partial sequencing of gene 16S rDNA and from the amplicons with specific primes ANAF/ANARpt_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Agronomia) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Agronomiapt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/11916
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenameAgronomiapt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Agráriaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-graduação em Agronomiapt_BR
dc.subjectMilhopt_BR
dc.subjectDoenças e pragaspt_BR
dc.subjectBactérias fitopatogênicaspt_BR
dc.subjectPlantas hospedeiraspt_BR
dc.subjectCornpt_BR
dc.subjectDiseases and pestspt_BR
dc.subjectPhytopathogenic bacteriapt_BR
dc.subjectHost plantspt_BR
dc.titleEstudos etiológicos da mancha branca do milho e identificação de hospedeiros alternativos de Pantoea ananatispt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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