Clonagem e expressão do gene paa e resposta imune humoral de matrizes suínas vacinadas com proteínas recombinantes (F4, F5, F6, F18, F41 e Paa) de Escherichia coli patogênicas
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Pereira, Daniele Araujo
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Resumo
Resumo: Escherichia coli (E coli) enterotoxigênica (ETEC) é considerada importante causa de diarreia em suínos neonatos e desmamados A adesão da bactéria à célula do hospedeiro é considerada um fenômeno específico entre as adesinas fimbriais e não fimbriais com seus respectivos receptores nos enterócitos Os distúrbios entéricos estão relacionados com as fímbrias F4 (K88), F5 (K99), F6 (987P), F41 e F18 Além da ETEC, outra categoria de E coli pode causar diarreia nos suínos, denominada de PEPEC (porcine pathogenic E coli), a qual produz a adesina Paa (Porcine attaching adherence) capaz de provocar uma lesão típica denominada A/E (attaching and effacing) A imunização das matrizes com adesinas é importante para estimular a produção de anticorpos e a consequente transferência através do colostro aos leitões O objetivo deste trabalho foi produzir uma vacina inovadora e completa para E coli e comparar a resposta imune das matrizes imunizadas com as proteínas recombinantes (ETEC e EPEC) com uma vacina comercial de ETEC O trabalho foi realizado em uma granja comercial, onde foram utilizadas nove matrizes suínas prenhes divididas em três grupos O grupo um (G1) foi vacinado com as proteínas recombinantes (n=3), o grupo dois (G2) foi vacinado com vacina comercial (n=3) e o grupo três (G3) foi inoculado com salina tamponada estéril (PBS) (n=3) As proteínas recombinantes foram obtidas após a indução das amostras de E coli BL21 (DE3) com adição de lactose O grau de pureza foi analisado em gel SDS-PAGE corado com Comassie A dose da vacina de proteínas recombinantes continha 1µg de cada antígeno recombinante e adjuvante Hidróxido de Alumínio 2mg/ml com conservante Timerosal a ,2% As matrizes prenhes foram imunizadas quatro e duas semanas antes do parto Amostras de sangue das matrizes foram coletadas para avaliação dos níveis de anticorpos através do teste de ELISA indireto, no dia da primeira dose (dia), na segunda imunização (dia 14) e no dia do parto (dia 28) Quatro leitões de cada matriz foram selecionados para analisar o soro A vacina comercial continha quatro fímbrias (K88, K99, F41, 987) e a vacina de proteína recombinante cinco fímbrias (rF18, rK88, rK99, rF41, r987) e rPaa Os resultados foram submetidos ao Teste de Kruskal-Wallis para verificar diferença entre os grupos analisados que se identificado foi aplicado o Teste de Dunn a 6% de significância Os animais inoculados com a vacina recombinante apresentaram reatividade maior que os animais inoculados com a vacina comercial e animais do grupo controle (PBS) A vacina de proteína recombinante obteve uma resposta vacinal significativa nas matrizes com as fímbrias (K99, F18, K88 e 987) e nos leitões com as fímbrias (K99, F18, 987, F41, K88) A vacina de proteína recombinante estimulou a resposta imune humoral específica nas matrizes, mas não foi possível afirmar se houve proteção dos leitões Os resultados mostram a importância da vacinação das matrizes para aumentar os níveis de anticorpos anti-fimbrias e assim prevenir a diarreia
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Palavras-chave
Colibacilose, Suíno, Doenças, Resposta imune, Enterobacterias, Colibacillosis, Diseases, Enterobacterial vaccines, Veterinary vaccines, Swine