02 - Mestrado - Ciências Biológicas
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Navegando 02 - Mestrado - Ciências Biológicas por Assunto "Água"
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Item Aplicação de biomarcadores para análise dos efeitos de herbicidas isolados e em mistura no bivalve Corbicula flumineaSantos, Kelly Cristina dos; Martinez, Cláudia Bueno dos Reis [Orientador]; Teixeira, Gustavo Monteiro; Souza, Marta Marques deResumo: Atrazina e Roundup® se enquadram entre os herbicidas mais consumidos no Brasil e no mundo, sendo potencialmente tóxicos aos organismos aquáticos Assim, o presente trabalho analisou o efeito agudo (6, 24 e 96 h) dos herbicidas atrazina (ATZ) e Roundup® (RD) isolados ou como mistura no bivalve dulcícola Corbicula fluminea Para ATZ, as concentrações foram de 2 (ATZ 2) e 1 (ATZ 1) ppb; para RD, foram de 2 (RD 2) e 1 (RD 1) ppm; e para a mistura, foram de 2 ppb de ATZ + 2 ppm de RD (AR 2) e 1 ppb de ATZ + 1 ppm de RD (AR 1) Foram analisadas, em brânquia (BRQ) e glândula digestiva (GL), as defesas antioxidantes: catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD), glutationa peroxidase (GPx), glutationa redutase (GR) e glutationa reduzida (GSH); enzimas de biotransformação: etoxiresorufina-O-desetilase (EROD), glutationa-S-transferase (GST) e mecanismo de resistência a multixenobióticos (MXR); a ocorrência de lipoperoxidação (LPO) O teste do cometa foi realizado com os hemócitos para análise de danos ao DNA As enzimas de biotransformação e as defesas antioxidantes se mostraram mais alteradas nos tempos de exposição mais curtos (6 e 24 h), nos quais, para ambos os herbicidas, foi observado inibição da CAT e MXR e aumento da SOD e GPx Já a ATZ, promoveu inibição da EROD na BRQ e aumento da EROD e GSH na GL, e a GR se apresentou inibida em ambos os tecidos apenas por RD A maioria das alterações em 6 e 24 h foram observadas em ATZ 2, possivelmente pela atuação de mecanismos de barreira em ATZ 1, como produção de muco Os principais danos oxidativos foram observados em 96 h, quando o RD aumentou em mais de três vezes a ocorrência de LPO em BRQ e GL, além da inibição da EROD branquial em quase 8% pela ATZ Com exceção da GSH e LPO, os demais biomarcadores se apresentaram significativamente diferentes entre os dois órgãos analisados, e a BRQ mostrou-se a principal fonte da EROD, MXR, SOD e GPx e a GL da GST, CAT e GR; estas diferenças podem estar relacionadas com a localização e função dos órgãos no animal A exposição à mistura dos herbicidas não promoveu alteração nas defesas antioxidantes analisadas, com exceção da GR Efeito antagônico foi observado na EROD branquial, a qual apresentou inibição menos intensa que a observada para ATZ isolada, e em LPO, onde além da neutralização do efeito de LPO do RD isolado, houve uma diminuição da ocorrência deste tipo de dano em AR 1 Já para MXR e danos ao DNA, foi observado efeito de potencialização, uma vez que os herbicidas promoveram alterações significativas nestes biomarcadores apenas quando misturados Assim, a mistura de herbicidas apresentou mecanismos de toxicidade bastante complexos, não apresentando um padrão aparente de alteração nos biomarcadores analisados A EROD e LPO se apresentaram como bons biomarcadores de efeito da ATZ e RD, respectivamente, e MXR e teste do cometa, para a mistura dos herbicidas, a qual se apresentou potencialmente tóxica para o bivalveItem Biomarcadores funcionais e histológicos associados à exposição do peixe prochilodus lineatus ao óleo dieselSimonato, Juliana Delatim; Martinez, Cláudia Bueno dos Reis [Orientador]; Souza, Ângela Teresa Silva e; Fernandes, Marisa NarcisoResumo: Considerando-se o elevado número de acidentes com petróleo e seus derivados que vem ocorrendo atualmente no Brasil e a escassez de trabalhos sobre os efeitos destes contaminantes nos organismos aquáticos, testes de toxicidade voltados para a avaliação dos efeitos destes poluentes em espécies de peixes de ambientes neotropicais são necessários e urgentes Desta forma, o presente estudo teve como objetivo avaliar os efeitos do óleo diesel em parâmetros bioquímicos, fisiológicos e histológicos da espécie de peixe Neotropical Prochilodus lineatus (curimba), após exposição aguda e sub-crônica à fração solúvel de óleo diesel (FSD) Para o preparo da fração solúvel do diesel em água (FSD) o óleo diesel automotivo comercial foi adicionado à água (1:4) e a mistura foi exposta à radiação solar direta, simulando um derrame de diesel em ambiente tropical; após, a fração solúvel foi coletada e diluída em água de poço artesiano em duas diferentes proporções, de acordo com a série experimental Numa primeira série experimental os peixes foram expostos à FSD diluída para 4%, durante 24, 48 e 96 horas e 15 dias e apenas à água (controle) Numa segunda série experimental, os peixes foram expostos a uma solução um pouco mais concentrada, sendo a FSD diluída para 5%, durante 6, 24 e 96 horas e 15 dias Na primeira série, os animais expostos à FSD apresentaram hiperglicemia após 24, 48 e 96 horas refletindo a mobilização de reservas energéticas As concentrações plasmáticas das proteínas totais e íons sódio e cloreto permaneceram estáveis, sendo constatada apenas uma variação transitória da osmolaridade após 15 dias Os peixes apresentaram aumento significativo na atividade da GST hepática após 15 dias de exposição, indicando a ativação das reações de biotranformação associadas ao metabolismo dos compostos presentes na FSD Os peixes expostos à FSD não apresentaram alterações significativas na atividade hepática da catalase em relação aos grupos controles Na segunda série de experimentos, além da inclusão de um tempo de exposição mais curto (6h), alguns parâmetros também foram incorporados à análise na tentativa de se compreender melhor os efeitos da FSD para P lineatus Foi observada diminuição do conteúdo de hemoglobina e do hematócrito nos dois últimos tempos experimentais Estes resultados hematológicos associados ao aumento do potássio, que foi observado nos mesmos períodos, devem refletir a hemólise dos eritrócitos decorrente da exposição à FSD A hiperglicemia, encontrada após 24h e 96h de exposição, e a diminuição da concentração plasmática de proteínas totais, após 15 dias, refletem uma mobilização energética provavelmente mediada pela ação das catecolaminas, visto que não houve indicação de elevação do cortisol A liberação de cortisol parece ter sido inibida pelo diesel, como indicada pela redução significativa de sua concentração após 15 dias, em relação ao grupo controle Os peixes desta segunda série também apresentaram ativação da GST hepática após 96h e 15 dias de exposição à FSD, confirmando assim os resultados encontrados nos experimentos da primeira série e reforçando a idéia da estimulação das reações de biotranformação, associadas ao metabolismo dos hidrocarbonetos aromáticos presentes na FSD O fato de não ter havido indução da catalase hepática, em ambos experimentos, não exclui a possibilidade de ter ocorrido aumento na geração de oxi-radicais após a exposição à FSD, pois outras enzimas podem ter atuado na metabolização dos hidroperóxidos Assim como na primeira série experimental, os parâmetros osmo-iônicos dos animais expostos à FSD, com exceção do potássio, mantiveram-se, no geral, estáveis indicando que o diesel não interferiu no balanço osmo-iônico desses peixes Os animais expostos à FSD apresentaram alterações histológicas moderadas nas brânquias e danos severos no fígado, que devem refletir a ação da FSD na integridade desses tecidos e o possível prejuízo de processos fundamentais para a manutenção da homeostase desses peixes Portanto, fica claro que o óleo diesel promove alterações significativas em alguns parâmetros bioquímicos, fisiológicos e histológicos de Prochilodus lineatus e dentre estes parâmetros os melhores candidatos a biomarcadores para o monitoramento de locais contaminados com diesel seriam: atividade da GST hepática, concentração plasmática de cortisol, conteúdo de hemoglobina e hematócrito, níveis glicêmicos e as alterações histológicas nas brânquias e no fígadoItem Ensaios in vitro com a linhagem celular ZF-L para análise dos efeitos de gasolina e efluentes de postos de combustívelLachner, Débora; Martinez, Cláudia Bueno dos Reis [Orientador]; Souza, Marta Marques de; Sofia, Silvia HelenaResumo: O uso de linhagens celulares e bastante promissor como modelo biologico in vitro, tanto para a melhoria do rendimento dos testes de toxicidade quanto para reducao dos seus custos Destaca-se no presente trabalho a utilizacao da linhagem celular permanente de hepatocitos de Danio rerio, denominada ZF-L Diversos trabalhos comprovam a sensibilidade de ZF-L quando expostas a diversos contaminantes, com a utilizacao satisfatoria de diferentes biomarcadores Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a toxicidade da fracao soluvel em agua da gasolina (FSG) e de um efluente de posto de combustivel (EF) para ZF-L Para isso, foi feita a exposicao das celulas por 1, 3 e 6 h a diferentes diluicoes de FSG e EF A FSG foi obtida simulando derrame de gasolina em ambiente tropical e o EF foi coletado do ultimo tanque de decantacao de um posto de combustivel Antes da exposicao foram feitas diferentes diluicoes das solucoes teste em agua destilada, com adicao dos sais da salina tamponada com fosfato (PBS) Para verificacao da citotoxicidade, foram aplicados os testes de viabilidade celular por exclusao do azul de tripan (AT) e o de reducao do brometo de dimetiltiazol difeniltetrazolio (MTT), testando as diluicoes de 5, 1, 25 e 5% dos contaminantes O controle foi feito expondo as celulas apenas ao PBS A partir dos resultados obtidos pelo AT, foram selecionadas as diluicoes com viabilidade celular maior que 8% para aplicacao do ensaio do cometa, quantificacao de especies reativas de oxigenio (ERO) e capacidade antioxidante total (CAOT) Os resultados da viabilidade celular para ambos os poluentes, tanto para AT quanto para o MTT obedeceram a um padrao de resposta concentracaodependente Demonstram tambem a maior citotoxicidade do EF em relacao a FSG, provavelmente devido a visivel presenca de detergentes em sua composicao Para o ensaio do cometa, ERO e CAOT foram selecionadas as diluicoes de 5, 1 e 25% de FSG e 5 e 1% de EF Com relacao a quantificacao de ERO e CAOT, foi verificada menor producao de ERO nas amostras expostas aos poluentes e CAOT aumentada em relacao ao controle, demonstrando que nas concentracoes e periodos de exposicao avaliados as ZF-L aumentaram suas defesas antioxidantes, evitando o estresse oxidativo O ensaio do cometa indicou a alta genotoxicidade de FSG, com escores de dano proximos ao valor maximo (3), que seguiram um padrao concentracao-dependente No caso das ZF-L expostas ao EF nao houve uma relacao concentracao-dependente na ocorrencia de danos no DNA e os escores apos 1 h foram maiores que o controle, mas apos 6 h foram significativamente menores nas amostras tratadas com EF que no controle, indicando uma possivel atuacao do sistema de reparo de DNA Assim, e possivel afirmar que o EF apresentou alto potencial citotoxico enquanto a FSG apresentou alto potencial genotoxico para as ZF-L, nas concentracoes e nos tempos estudados, e que ZF-L apresenta-se como modelo biologico adequado para verificacao da qualidade ambiental