02 - Mestrado - Ciências Farmacêuticas

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Navegando 02 - Mestrado - Ciências Farmacêuticas por Autor "Bispo, Marcelle de Lima Ferreira"

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    Estudos in silico de tioureias como potenciais inibidores da enzima mtbhadab e encapsulamento com lipossomas
    (2024-04-30) Milani, Vinicius de Melo; Bispo, Marcelle de Lima Ferreira; Camargo, Priscila Goes; Cabeça, Luis Fernando; Viana, Renato Márcio Ribeiro
    A Tuberculose (TB) é uma doença infecciosa causada pelo Mycobacterium tuberculosis que é uma grande preocupação global. Ocorrências de cepas resistentes deste agente infeccioso é um fator agravante, elevando assim a necessidade pela busca de novas alternativas de tratamento para esta doença que assola a humanidade há milênios. O Isoxil (ISO), também conhecido como Tiocarlida, é um importante agente antimicobacteriano, da classe das tioureias, que foi utilizado para controle de casos de TB na década de 1960, porém, caiu em desuso devido a sua baixa biodisponibilidade oral. Mecanismos relatados em literatura associam sua atividade com a capacidade de inibir a (3R)-hidroxiacil-ACP-desidratase (HadAB), enzima esta que participa da biossíntese de ácidos micólicos, que compõem a estrutura da parede celular da micobactéria. Os estudos computacionais de triagem virtual baseada em docagem molecular surgem como importante alternativa para seleção in sílico das substâncias a serem avaliadas, o que pode acelerar e reduzir os custos na descoberta de novos fármacos. Tendo em vista o potencial dos derivados de tioureias como possíveis inibidores da enzima HadAB, realizou-se uma triagem virtual baseada em docagem molecular de 99 benzoiltioureias presentes na quimioteca do Laboratório de Síntese de Moléculas Medicinais (LaSMMed), visando identificar potenciais inibidores dessa enzima com possível atividade antimicobacteriana. Iniciou-se o trabalho com a validação do protocolo de docagem molecular pelo método de redocagem, considerando-se a ausência ou presença de moléculas de água no complexo e, quando presentes, foi avaliada a influência da flexibilidade delas no protocolo estabelecida. Assim, a função GoldScore foi escolhida para ser utilizada na docagem molecular, onde as moléculas de águas mantidas flexíveis em até 1,0 Å. Em seguida, os ligantes foram preparados considerando-se a possível oxidação das tioureias em seus respectivos ácidos sulfênicos pela enzima micobacteriana EthA, uma vez que esse processo é bastante conhecido e já relatado na literatura para o ISO. Por fim, o processo de triagem virtual foi realizado e quatro substâncias e seus respectivos estereoisômeros (4, 6, 79 e 80) foram selecionadas para avaliação de suas interações por apresentarem valores de fitness score (FS) promissores. Essa análise demonstrou que tais estruturas realizam interações com resíduos essenciais para o mecanismo catalítico da enzima, bem como para o reconhecimento molecular, o que constitui importantes indícios deque possam atuar como potenciais inibidores do alvo HadAB. Além disso, aspectos de fármaco-similaridade avaliados pelo conjunto de regra dos cinco de Lipinski e extensão de Veber revelaram características fármaco-similares melhoradas quando comparados com ISO. Entretanto, preocupações com a elevada lipossolubilidade das tioureias indicam a necessidade de se desenvolver tecnologias para liberação de fármacos como meio para veiculação do ligante, visando a confirmação experimental in vitro dos resultados obtidos in sílico.
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    Perfil fitoquímico e solidagenoma isolada de raízes de Solidago chilensis Meyen : avaliação dos efeitos em modelos biológicos explantes de pele de suíno
    Matos, Ricardo Luís Nascimento de; Arakawa, Nilton Syogo [Orientador]; Headley, Selwyn Arlington; Bispo, Marcelle de Lima Ferreira; Bracarense, Ana Paula Frederico Rodrigues Loureiro [Coorientadora]
    Resumo: Solidago chilensis Meyen (Asteraceae) é uma planta utilizada na medicina popular em diferentes tipos de traumas, contusões, analgésica e anti-inflamatória No entanto, poucos estudos caracterizaram os compostos isolados e avaliaram a atividade terapêutica O objetivo deste estudo foi identificar as principais classes de metabólitos secundários de raízes de S chilensis M, isolar e identificar a solidagenona e verificar seu efeito biológico em modelo explante de pele de suíno As raízes foram coletadas 22/3/217 durante a floração e secas em estufa (5 °C) O perfil fitoquímico na identificação das classes de metabólitos secundários procedeu com ensaios gerais de complexação, turvação, precipitação, colorimétricos, afrogênico e cromatografia em camada delgada comparativa O extrato bruto de raízes diclorometânico foi obtido por maceração exaustiva, seco por rotaevaporação e fracionado em cromatografia líquida a vácuo em gradiente crescente de polaridade A solidagenona foi isolada, após sucessivas lavagens com metanol gelado e recristalizada para a determinação estrutural realizada por espectrometria de massa de ionização por eletrospray (MS-ESI), ressonância magnética nuclear (RMN) e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) Utilizou-se microscopia eletrônica de varredura (MEV) e difração de raio-X para avaliação morfológica dos cristais, além de analise térmica do ponto de fusão (PF) A avaliação dos efeitos biológicos ex vivo com pele de suíno foi realizada durante oito dias de incubação e seis tratamentos - controle, DMSO ,5%, extrato bruto (,1 mg mL-1) e solidagenona (,6, ,3 e ,1 mg mL-1), usando DMSO como veículo A integridade tecidual foi realizada por escore morfológico histológico e por resposta oxidativa a cada dois dias de incubação Para análises estatísticas aplicou-se ANOVA e teste de Tukey (p < ,5) As classes de metabólitos secundários identificadas foram flavonoides, taninos hidrolisáveis, saponinas e terpenos Da fração 8:2 isolou-se 1,3 g de solidagenona (correspondendo a 3,3% do extrato bruto – m/m), de peso molecular de 316 m z-1, verificada por MS-ESI e os resultados espectroscópicos de deslocamento químico de carbono e hidrogênio de RMN corroboram a literatura Observou-se pureza relativa de 98% de solidagenona identificada por CLAE Os cristais apresentaram formato hexagonal observado pela MEV, sugerindo a formação de redes cristalográficas hexagonais em duas fases avaliadas por difração de raios X e PF 131 °C As principais alterações morfológicas na pele – apoptose, degeneração e fenda derme-epiderme – foram observadas em todos os tratamentos No entanto, o escore morfológico do tratamento utilizando a maior dose de solidagenona (,6 mg mL-1) diferiu estatisticamente do DMSO no quarto, sexto e oitavo dias, mantendo a melhor integridade tecidual e aumentou a capacidade antioxidante no sexto dia, em relação ao DMSO e ao controle Conclui-se que as raízes de S chilensis contêm flavonoides, taninos hidrolisáveis, saponinas e terpenos como classes de metabólitos secundários, identifica a solidagenona como composto principal, indicando um possível efeito protetor tecidual aos explantes de pele com este metabólito