Desenvolvimento de qPCR para diagnóstico de Eimeria spp. em bovinos

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dc.contributor.advisorGarcia, João Luis
dc.contributor.authorCardim, Sérgio Tosi
dc.contributor.bancaCrhyssafidis, Andréas Lazaros
dc.contributor.bancaBreganó, Regina Mitsuka
dc.contributor.bancaGuimarães Junior, José da Silva
dc.contributor.bancaAlexey Leon Gomel Bogado
dc.coverage.extent69 p.
dc.coverage.spatialLondrina - PR
dc.date.accessioned2024-10-10T13:44:57Z
dc.date.available2024-10-10T13:44:57Z
dc.date.issued2018-02-28
dc.description.abstractA coccidiose bovina é uma enfermidade de grande importância em rebanhos bovinos ao redor do mundo. Esta enfermidade é causada por protozoários, do gênero Eimeria e afeta principalmente animais com menos de 12 meses, sendo as espécies E. bovis e E. zuernii as de maior importância clínica, podendo causar diarréia severa com sangue em bezerros infectados. O diagnóstico de rotina desta doença é realizado através da observação morofológica dos oocisto, os quais precisam estar esporulados para identificação da espécie envolvida, o que leva em torno de 10 a 15 dias,tornando o mesmo muito laborioso e com necessidade de alto treinamento do leitor, dificuldando um diagnóstico mais rápido e consequente tratamento mais rápido dos animais. Devido as estes fatores, o objetivo deste trabalho foi desenvolver técnicas de qPCR para o diagnóstico do gênero Eimeria e das espécies de maior patogenia, E. bovis e E. zuernii. Para isto foram selecionados o gene 18S rRNA para o gênero Eimeria e o gene ITS-1 para diferenciação das espécies, isto porque o gene 18S tem pouca variabilidade entre as espécies enquanto o gene ITS-1 tem uma alta variabilidade interespecifica, com baixa variabilidade dentro da espécie, visando assim uma alternativa de diagnóstico mais rápida e sensível. As PCRs foram realizadas utilizando SYBR Green como fonte de fluorenscencia. Tanto os primers desenvolvidos para o gênero, quanto os desenvolvidos para a espécie E. zuernii apresentaram alta sensibilidade, tendo a capacidade de amplificar amostrar contendo apenas um oocisto do parasita. Já os primers desenvolvidos para E. bovis apresentaram uma sensibilidade inferior, sendo capazes de detectar positividade em amostras de campo contendo 50 oocistos por grama de fezes. Para avaliação da especificidade das técnicas foram utilizadas amostras contendo Cryptosporidium spp. e Giardia spp., sendo que todas as técnicas apresentaram negatividade tanto para Giardia spp., quanto para Cryptosporidium spp. Baseado nos resultados encontrados neste estudo, conclui-se que os primers desenvolvidos apresentaram alta sensibilidade e especificidade no diagnóstico de Eimeria em bovinos
dc.description.abstractother1Bovine coccidiosis is a disease of great importance in cattle herds around the world. This disease is caused by protozoa of genus Eimeria and mainly affects animals less than 12 months old. E. bovis and E. zuernii species are the most clinically important and can cause severe diarrhea with blood in infected calves. The routine diagnosis of this disease is made through the morphological observation of oocysts, which need to be sporulated to identify the species involved, process can take around 10 to 15 days, making it very laborious and in need of high training of the reader, hindering a faster diagnosis and consequent faster treatment of the animals. Due to these factors, the objective of this study was to develop qPCR techniques for the diagnosis of genus Eimeria and species with greatest pathogenesis, E. bovis and E. zuernii. The 18S rRNA gene for genus Eimeria and the ITS-1 gene for species differentiation were selected because the 18S gene has low variability among the species while the ITS-1 gene has a high interspecific variability with low variability within species, aiming at a faster and more sensitive diagnostic alternative. The PCRs were performed using SYBR Green as a source of fluorenscence. Both primers developed for genus and those developed for E. zuernii species presented high sensitivity, having the ability to amplify sample containing only one oocyst of the parasite. The primers developed for E. bovis had a lower sensitivity and were able to detect positivity in field samples containing 50 oocysts per gram of faeces. To evaluate the specificity of the techniques, samples containing Cryptosporidium spp. and Giardia spp. were used and all of which showed negativity for both. Based on the results found in this study, it was concluded that the primers developed showed high sensitivity and specificity in the diagnosis of Eimeria in cattle
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/17998
dc.languagepor
dc.language.isopor
dc.relation.departamentCCA - Departamento de Clínicas Veterinárias
dc.relation.institutionnameUniversidade Estadual de Londrina - UEL
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Ciência Animal
dc.subjectEimeria
dc.subjectqPCR
dc.subjectE. bovis
dc.subjectE. zuernii
dc.subject.capesCiências Agrárias - Medicina Veterinária
dc.subject.cnpqCiências Agrárias - Medicina Veterinária
dc.subject.keywordsEimeria
dc.subject.keywordsqPCR
dc.subject.keywordsE. bovis
dc.subject.keywordsE. zuernii
dc.titleDesenvolvimento de qPCR para diagnóstico de Eimeria spp. em bovinos
dc.title.alternativeDevelopment of qPCR for diagnosis of Eimeria spp. in cattle
dc.typeTese
dcterms.educationLevelDoutorado
dcterms.provenanceCentro de Ciências Agrárias

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