Análise dos fatores de virulência e proteoma de Candida tropicalis sensível e resistente ao fluconazol
| dataload.collectionmapped | 02 - Mestrado - Microbiologia | pt_BR |
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| dataload.handlemapped | 123456789/25 | pt_BR |
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| dc.contributor.advisor | Dias Filho, Benedito Prado [Orientador] | pt_BR |
| dc.contributor.author | Kanoshiki, Renata Lumi | pt_BR |
| dc.contributor.banca | Venâncio, Emerson José | pt_BR |
| dc.contributor.banca | Yamaguchi, Mirian Ueda | pt_BR |
| dc.contributor.coadvisor | Yamada-Ogatta, Sueli Fumie [Coorientadora] | pt_BR |
| dc.coverage.spatial | Londrina | pt_BR |
| dc.date.accessioned | 2024-05-01T13:11:27Z | |
| dc.date.available | 2024-05-01T13:11:27Z | |
| dc.date.created | 2010.00 | pt_BR |
| dc.date.defesa | 15.03.2010 | pt_BR |
| dc.description.abstract | Resumo: Espécies de Candida são agentes oportunistas mais frequentes em infecções fúngicas Embora Candida albicans seja a principal e a mais estudada espécie do gênero Candida, espécies não-albicans vêm emergindo como importantes agentes de candidíases Entre as espécies não-albicans relata-se C tropicalis como importante agente etiológico de candidemia em pacientes com câncer, principalmente aqueles com leucemia Em países da América Latina, esta espécie é bastante frequente, mesmo entre pacientes não portadores de câncer, sendo a segunda principal causa de candidemia no Brasil A alta mortalidade de pacientes infectados por C tropicalis e o surgimento de isolados resistentes a antifúngicos corroboram sua importância clínica Na literatura relata-se que a exposição de Candida spp a antifúngicos influencia na expressão de fatores de virulência, dos quais se destacam: aderência a tecidos do hospedeiro, morfogênese, formação de biofilme e secreção de enzimas Haja vista sua importância à patogênese, este trabalho teve como objetivo estudar a influência do fluconazol sobre os fatores de virulência e o proteoma de isolados de C tropicalis Para tanto, fatores de virulência de C tropicalis em amostras isoladas de cavidade bucal, ponta de cateter e hemocultura foram analisados Nesta última, os fatores de virulência foram avaliados também após breve exposição ao fluconazol (1 h) e após desenvolvimento de resistência in vitro Ademais, foi realizada análise comparativa do proteoma dos isolados de C tropicalis resistentes e sensíveis ao fluconazol, e comparação de células planctônicas e sésseis Para a identificação das espécies foram utilizados testes fenotípicos padrões e semi-nested PCR A concentração inibitória mínima (CIM) para o fluconazol foi determinada por microdiluição em caldo A atividade de protease foi avaliada em placa utilizando-se meio mínimo contendo caseína de leite ,6%, enquanto a atividade de fosfolipase e hemolisina foram investigadas em Sabouraud Dextrose Agar com gema de ovo a 4% e sangue de carneiro a 5%, respectivamente O ensaio de hidrofobicidade da superfície celular (CSH) foi realizado pela técnica de Anil et al (21) Para a formação de biofilme foram utilizados dois diferentes métodos: avaliação da porcentagem de transmitância bloqueada (%Tbloc) e o ensaio de redução do XTT A adesão em poliestireno e células de mamíferos também foi analisada Todas as amostras não apresentaram atividade de fosfolipase e foram capazes de hemolisar parcialmente sangue de carneiro (similar a hemólise do tipo alfa de Streptococcus spp) Diferenças relacionadas à origem das amostras (p< ,5) foram encontradas quanto à produção de biofilme, e hidrofobicidade celular Nesses ensaios, amostras de cateter e de cavidade bucal apresentaram maior capacidade de produção de biofilme e maior hidrofobicidade celular em relação à amostra de hemocultura A resistência in vitro só foi obtida para o isolado de sangue, e diferenças significativas (p< ,5) foram detectadas na atividade proteolítica, formação de biofilme e CSH Em todos os casos, a cepa resistente ao fluconazol apresentou maior atividade para os fatores analisados e a breve exposição ao fluconazol resultou em diminuição da expressão das mesmas Foi observado também correlação entre formação de biofilme e hidrofobicidade da superfície celular Na análise proteômica, as proteínas totais foram extraídas por método mecânico e os géis bidimensionais foram corados com Coomassie G-25 coloidal Após análise comparativa dos géis, 7 e 2 polipeptídeos mostraram-se diferencialmente expressos por células planctônicas das cepas sensível e resistente, respectivamente Por outro lado, quando os proteomas de células sésseis foram comparados, 1 e 11 polipeptídeos apresentaram expressão diferencial na cepas sensível e resistente, respectivamente Finalmente, 5 e 7 polipeptídeos foram diferenciamente expressos em células planctônicas e sésseis da cepa sensível ao fluconazol | pt_BR |
| dc.description.abstractother1 | Abstract: Candida species represent the most frequent opportunistic pathogen among the fungal infections Although Candida albicans is the most prevalent and studied species, Candida non-albicans species have currently emerged C tropicalis is reported as an important etiologic agent of candidemia in patients with cancer, mainly in patients with leukemia In Latin America, this species is significantly frequent, even in non-cancer patients, representing the second main cause of candidemia in Brazil The high mortality in C tropicalis infections and the emergence of antifungal resistant isolates corroborate its clinical importance It is reported in the literature a correlation between Candida spp antifungal exposure and the expression of virulence factors, which include adhesion to host tissues, morphogenesis, biofilm formation and enzyme secretion The aim of this study was to investigate the effect of fluconazole on virulence factors and the proteome of Candida tropicalis First, virulence factors of C tropicalis isolated from the oral cavity, catheter tip and bloodstream infection were analyzed For the blood isolate, the virulence factors were also evaluated after brief exposure to fluconazole (1 h) and after in vitro resistance development Furthermore, we performed comparative proteome analysis of Candida tropicalis strains, resistant and susceptible to fluconazole, and planktonic and sessile cells For the species identification, semi-nested PCR and phenotypic tests were performed The minimal inhibitory concentration (MIC) of fluconazole was determined by broth microdilution The proteolytic activity was evaluated in minimum medium plates containing skim milk 6% For phospholipase and hemolytic activity, plates with Sabouraud Dextrose Agar supplemented with egg yolk 4% and sheep blood 5% were used, respectively The cell surface hydrophobicity (CSH) assay was performed as described by Anil et al (21) Relative to the biofilm formation, two different methods were used: the percentage of blocked transmitance (%Tbloc) method, and the XTT reduction assay Adherence to polystyrene and mammalian ephitelial cells was also analyzed All isolates and strains were negative to phospholipase production and presented alpha-like hemolysis Differences related to the isolates origins (p< 5) were found for biofilm and CSH properties In these assays, isolates from catheter and oral cavity presented greater capacity of biofilm production, and higher cellular hidrophobicity compared to bloodstream infection sample The successful in vitro fluconazole resistance was obtained only for bloodstream isolate, and significant differences (p< 5) were found in the proteolytic activity, biofilm formation and CSH The fluconazole resistant strain presented higher values for the analyzed factors, and the brief fluconazole exposure resulted in reduction of these virulence factors expressions It was also observed a correlation between biofilm formation and CSH In proteomics analysis, the total proteins extraction was performed by mechanical method and two-dimensional gels were stained with colloidal Coomassie G-25 After comparison of the gels, 7 and 2 polypeptides were shown to be differentially expressed by planktonic cells of susceptible- and resistant- strains, respectively On the other hand, when the proteomes of sessile cells were analyzed, 1 and 11 polypeptides showed differential expression in the susceptible- resistant- strains, respectively Finally, 5 and 7 diferent polypeptides were expressed in planktonic and sessile cells of the fluconazole susceptible strain, respectivelly | pt_BR |
| dc.description.notes | Dissertação (Mestrado em Microbiologia) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Microbiologia | pt_BR |
| dc.identifier.uri | https://repositorio.uel.br/handle/123456789/11222 | |
| dc.language | por | |
| dc.relation.coursedegree | Mestrado | pt_BR |
| dc.relation.coursename | Microbiologia | pt_BR |
| dc.relation.departament | Centro de Ciências Biológicas | pt_BR |
| dc.relation.ppgname | Programa de Pós-Graduação em Microbiologia | pt_BR |
| dc.subject | Candida | pt_BR |
| dc.subject | Fungos patogênicos | pt_BR |
| dc.subject | Drogas | pt_BR |
| dc.subject | Resistência | pt_BR |
| dc.subject | Virulência (Microbiologia) | pt_BR |
| dc.subject | Virulence (Microbiology) | pt_BR |
| dc.subject | Resistance to drugs | pt_BR |
| dc.subject | Anti-infective agents | pt_BR |
| dc.title | Análise dos fatores de virulência e proteoma de Candida tropicalis sensível e resistente ao fluconazol | pt_BR |
| dc.type | Dissertação | pt_BR |
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