Estudo de biomarcadores inflamatórios, metabólicos, de estresse oxidativo e genéticos em pacientes com acidente vascular encefálico isquêmico agudo

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dc.contributor.advisorReiche, Edna Maria Vissoci [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorAlfieri, Daniela Frizonpt_BR
dc.contributor.bancaAmarante, Marla Karinept_BR
dc.contributor.bancaLehmann, Marcio Franciscopt_BR
dc.contributor.bancaOliveira, Sayonara Rangel dept_BR
dc.contributor.bancaDelfino, Vinícius Daher Alvarespt_BR
dc.contributor.coadvisorSimão, Andréa Name Colado [Coorientadora]pt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T15:13:42Z
dc.date.available2024-05-01T15:13:42Z
dc.date.created2019.00pt_BR
dc.date.defesa26.02.2019pt_BR
dc.description.abstractResumo: Introdução: O acidente vascular encefálico isquêmico (AVEi) agudo é uma das principais causas de morte e incapacidade em todo o mundo É uma doença complexa e apresenta interação entre fatores não modificáveis (sexo, idade, genético) e modificáveis (hipertensão, dislipidemia, diabetes mellitus tipo 2, obesidade, tabagismo, entre outros) As vias inflamatória, metabólica e de estresse oxidativo e nitrosativo (IMO&NS) têm um papel importante durante o AVEi agudo e estão correlacionadas com a gravidade do evento e o prognóstico do paciente Muitos biomarcadores inflamatórios têm sido considerados úteis no auxílio ao diagnóstico e prognóstico do AVEi, sendo a Proteína C reativa (PCR) um dos mais amplamente utilizados na prática clínica Estudos sugerem uma associação entre variantes no gene da PCR, como o rs113864, em que há maior produção de PCR e risco para AVEi No entanto, resultados inconsistentes em relação a este polimorfismo têm sido descritos e muitos destes estudos têm sido realizados em populações etnicamente homogêneas Além disto, até presente data, não temos conhecimento da avaliação concomitante destes biomarcadores de IMO&NS em pacientes com AVEi agudo na população brasileira Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar os biomarcadores IMO&NS e o polimorfismo rs113864 no gene da PCR que possam predizer a suscetibilidade ao AVEi agudo, assim como a incapacidade funcional na admissão e o prognóstico a curto prazo Métodos: O estudo incluiu 176 pacientes com AVEi agudo atendidos no Pronto Socorro do Hospital Universitário da Universidade Estadual de Londrina, Londrina, Paraná, e 176 controles sem histórico de AVEi e infarto agudo do miocárdio Foram coletados dados demográficos, antropométricos, epidemiológicos e clínicos Os subtipos de AVEi foram classificados segundo os critérios de TOAST em 5 categorias: aterosclerose de grandes artérias (LAAS), lacunar (LAC), cardioembólico (CEI), outras etiologias (ODE) e etiologia indeterminada (UDE) A incapacidade funcional dos pacientes foi avaliada no momento da admissão e após três meses de evolução pela Escala de Rankin Modificada (mRS) Amostras de sangue periférico foram coletadas em até 24 horas após o diagnóstico de AVEi para a determinação de biomarcadores inflamatórios, tais como contagem de leucócitos periféricos e plaquetas, velocidade de hemossedimentação (VHS), níveis séricos de PCR por metodologia de alta sensibilidade (usPCR), ferritina, fator de necrose tumoral (TNF)-a, interleucina (IL)-6, IL-1, 25-hidroxivitamina D [25(OH)D] e homocisteína; glicose, insulina, colesterol total (CT), lipoproteína de baixa densidade (LDL) e lipoproteína de alta densidade (HDL) e triglicerídeos (TG) para os biomarcadores metabólicos; peroxidação lipídica (hidroperóxidos) e metabólitos do óxido nítrico (NOx) para os biomarcadores de estresse oxidativo e nitrosativo, respectivamente Para identificação dos genótipos do rs113864, o DNA genômico foi extraído das células do sangue periférico e uma sequência de 744 pares de bases do gene PCR foi amplificado pela reação em cadeia da polimerase (PCR) O produto obtido pela PCR foi submetido à digestão com a enzima de restrição HpyCH4III e analisado pelo método do polimorfismo no comprimento dos fragmentos de restrição (RFLP) Resultados: Os resultados obtidos foram apresentados e discutidos em dois artigos originais Para o primeiro artigo científico, foram incluídos 176 pacientes e 176 controles Todos os resultados foram ajustados para possíveis efeitos de variáveis ou covariáveis em análises multivariadas Modelos lineares gerais (GLM) com todos os IMO&NS e dados demográficos/clínicos mostraram que o melhor conjunto de preditores para AVEi agudo foi sexo (masculino), pressão arterial sistólica, glicose, NOx, hidroperóxidos, IL-6, leucócitos periféricos (todos positivamente associados) e 25(OH)D (negativamente associado) (p<,1) Na análise multivariada, sexo (homens) (p<,1), hipertensão (p<,1), tabagismo (p=,15) e usPCR (p<,1) foram estimados como preditores independentes AVEi Com este conjunto de biomarcadores, 89,4% de todos os pacientes com AVEi foram corretamente classificados com sensibilidade de 86,2% e especificidade de 93,% Na admissão do estudo, os valores de ferritina, IL-6, usPCR, leucócitos periféricos, VHS e glicose foram maiores entre aqueles com maior incapacidade (mRS=3) (p<,1) Além disso, níveis elevados de ferritina, IL-6, usPCR, VHS e glicose e menores níveis de 25(OH)D foram independetemente associados com pior prognóstico (mRS=3) após 3 meses (p<,1) Para o segundo artigo, foram analisados 168 pacientes e 166 controles A mediana (intervalo interquartílico) da usPCR foi de 7,5 mg/L (2,6-24,8) em pacientes com AVEi e 1,6 (,7-3,7) mg/L em controles (p<,1) A distribuição dos genótipos do rs113864 estava em equilíbrio de Hardy-Weinberg (p>,5) Nos pacientes, a frequência dos genótipos CC, CT e TT foi de 95 (56,55%), 6 (35,71%) e 13 (7,74%), respectivamente No grupo controle, a frequência destes genótipos foi de 91 (54,58%), 63 (37,95%) e 12 (7,23%), respectivamente Não foram observadas diferenças na distribuição do genótipo rs113864 entre pacientes e controles; além disso, os genótipos não foram associados às características epidemiológicas e clínicas, assim como à usPCR e outros biomarcadores inflamatórios no início do estudo em pacientes com AVEi (p>,5) Por outro lado, controles portadores do alelo T (genótipos CT + TT) apresentaram maiores níveis de usPCR (p=,5) e maior frequência de usPCR =3 mg/L que os portadores do genótipo CC [odds ratio (OR): 2,31; intervalo de confiança (IC) 95%: 1,1- 4,1, p=,45] Além disso, a idade, os valores de mRS no início do estudo e a usPCR contribuíram positivamente para o pior prognóstico (mRS=3) após três meses apenas em pacientes portadores do alelo T (p<,1) Conclusão: Estes resultados sugerem que um conjunto de biomarcadores IMO&NS pode ser útil para o auxílio na previsão da ocorrência de AVEi, assim como na avaliação precoce do prognóstico a curto prazo Além disso, a variante localizada no gene PCR, rs113864, por si só, não se mostrou um fator determinante para a susceptibilidade ao AVEi; no entanto, em pacientes portadores do alelo T, os níveis de usPCR foram preditores independentes para um pior desfecho após três meses do evento isquêmicopt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Introduction: Acute ischemic stroke (AIS) is one of the leading causes of death and disability worldwide It is a complex disease and presents interaction between unmodifiable risk factors (sex, age, genetic) and modifiable risk factors (hypertension, dyslipidemia, diabetes mellitus type 2, obesity, smoking, among others) The inflammatory, metabolic, oxidative and nitrosative (IMO&NS) pathways play an important role during AIS and are correlated with patient severity and prognosis Many inflammatory biomarkers have been found to be useful in helping the diagnosis and prognosis of AIS, with C-reactive protein (CRP) being one of the most widely used in clinical practice Studies suggest an association between CRP gene variants, such as rs113864, in which there is increased production of CRP and risk for stroke However, inconsistent results in relation to this polymorphism have been described and many of these studies have been performed in ethnically homogenous populations In addition, to date, we are not aware of the concomitant evaluation of these biomarkers of IMO&NS in patients with AIS in the Brazilian population Objective: The objective of this study was to evaluate the IMO&NS biomarkers and the PCR rs113864 variant that can be useful to predict susceptibility to AIS, as well as the functional disability at admission and short-term outcome Methods: The study included 176 patients with AIS treated at the Emergency Room of the University Hospital of the State University of Londrina, Londrina, Paraná, and 176 controls with no history of AIS and acute myocardial infarction Demographic, anthropometric, epidemiological and clinical data were collected The AIS subtypes were classified according to the TOAST criteria in five categories: large artery atherosclerosis (LAAS), lacunar (LAC), cardioembolic (CEI), other etiologies (ODE) and undetermined etiology (UDE) The functional disability of the patients was evaluated at the time of admission and after three-months follow-up using the modified Rankin Scale (mRS) Peripheral blood samples were collected up to 24 hours after the diagnosis of AIS for the determination of inflammatory biomarkers, such as peripheral leukocyte and platelet counts, erythrocyte sedimentation rate (ESR), serum levels of CRP using high sensitivity assay (hsCRP), ferritin, tumor necrosis factor (TNF)-a, interleukin (IL)-6, IL-1, 25-hydroxyvitamin D [25(OH)D], and homocysteine Glucose, insulin, total cholesterol (TC), low-density lipoprotein cholesterol (LDL), high-density lipoprotein cholesterol (HDL) and triglycerides (TG) were the metabolic biomarkers Lipidic peroxidation (hydroperoxides) and nitric oxide metabolites (NOx) were the oxidative and nitrosative stress biomarkers, respectively For identification of the rs113864 CRP genotypes, genomic DNA was extracted from the peripheral blood cells and a 744 base pair sequence of the CRP was amplified using the polymerase chain reaction (PCR) The product obtained by PCR was digested with the restriction enzyme HpyCH4III and analyzed by restriction fragment length polymorphism (RFLP) method Results: The results were presented and discussed in two original articles For the first article, 176 AIS patients and 176 controls were included All results were adjusted for possible effects of variables or covariables in multivariate analyzes General linear models (GLM) with all IMO&NS with demographic/clinical data showed that the best set of predictors for AIS were sex (male), systolic blood pressure, glucose, NOx, hydroperoxides, IL-6, leukocytes (all positively associated) and 25(OH)D (negatively associated) (p<1) In the multivariate analysis, sex (men) (p<1), hypertension (p<1), smoking (p=15) and hsCRP (p<1) were estimated as independent predictors of AIS With this set of biomarkers, 894% of all AIS patients were correctly classified with sensitivity of 862% and specificity of 93% At admission, the values of ferritin, IL-6, usPCR, peripheral leukocytes, ESR and glucose were higher among those with high functional disability (mRS=3) (p<1) In addition, elevated levels of ferritin, IL-6, usPCR, ESR and glucose and lower levels of 25(OH)D were independently associated with poor prognosis (mRS=3) after three-months follow-up (p<1) For the second article, 168 AIS patients and 166 controls were analyzed The median (interquartile range) of hsCRP was 75 (26-248) mg/L in AIS patients and 16 (7-37) mg/L in controls (p<1) The distribution of the rs113864 genotypes was in Hardy-Weinberg equilibrium (p>5) In the AIS patients, the frequency of CC, CT and TT genotypes was 95 (5655%), 6 (3571%) and 13 (774%), respectively In the control group, the frequency of these genotypes was 91 (5458%), 63 (3795%) and 12 (723%), respectively No differences were observed in the distribution of rs113864 genotype between patients and controls; in addition, genotypes were not associated with epidemiological and clinical characteristics, as well as with hsCRP and other inflammatory biomarkers in AIS patients (p>5) On the other hand, controls carrying the T allele (CT + TT genotypes) presented higher levels of hsCRP (p=5) and higher frequency of hsCRP =3 mg/L than those carrying the CC genotype [odds ratio (OR): 231, 95% confidence interval (CI): 11-41, p=45] In addition, age, mRS values at baseline and hsCRP contributed positively to the poorer prognosis (mRS=3) after three-months follow-up only in AIS patients carrying the T allele (p<1) Conclusion: These results suggest that a set of IMO&NS biomarkers may be useful for predicting the occurrence of AIS, as well as the early evaluation of short-term outcome In addition, the rs113864 variant located in the CRP gene, by itself, was not a determinant factor for susceptibility to AIS; however, in AIS patients carrying the T allele, the levels of hsCRP were independent predictors for a poor outcome after three months of the ischemic eventpt_BR
dc.description.notesTese (Doutorado em Ciências da Saúde) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúdept_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/16684
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeDoutoradopt_BR
dc.relation.coursenameCiências da Saúdept_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências da Saúdept_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Ciências da Saúdept_BR
dc.subjectAcidentes vasculares cerebraispt_BR
dc.subjectInflamaçãopt_BR
dc.subjectPolimorfismo (Genética)pt_BR
dc.subjectCerebrovascular diseasespt_BR
dc.subjectInflammationpt_BR
dc.titleEstudo de biomarcadores inflamatórios, metabólicos, de estresse oxidativo e genéticos em pacientes com acidente vascular encefálico isquêmico agudopt_BR
dc.typeTesept_BR

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