Imunoensaio ic-ELISA para aflatoxina : desenvolvimento, padronização e validação visando análise em amendoim

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dataload.collectionmapped02 - Mestrado - Ciência de Alimentospt_BR
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dc.contributor.advisorHirooka, Elisa Yoko [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorSilva, André Ribeiro dapt_BR
dc.contributor.bancaHashimoto, Elisabete Hiromipt_BR
dc.contributor.bancaIshikawa, Angélica Tiemept_BR
dc.contributor.coadvisorYamashita, Cássia Reika Takabayashi [Coorientadora]pt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T14:58:54Z
dc.date.available2024-05-01T14:58:54Z
dc.date.created2017.00pt_BR
dc.date.defesa03.02.2017pt_BR
dc.description.abstractResumo: O Estado de São Paulo se destaca pela maior produção de amendoim do Brasil, ocupando 92% da produção nacional A cultura do amendoim é suscetível à contaminação por aflatoxinas Estes metabólitos secundários tóxicos produzidos por fungos do gênero Aspergillus, apresentam efeitos tóxicos e carcinogênicos ao homem e animais O desenvolvimento de metodologias de triagem confiáveis, rápido e simples como o ensaio imunoenzimático pode ser alcançado empregando anticorpo monoclonal (AcM) O objetivo deste trabalho foi desenvolver, padronizar e validar imunoensaio enzimático indireto competitivo (ic-ELISA) para quantificação de aflatoxina B1 em amendoim Amendoins da região Alta Paulista, estado de São Paulo, foram avaliados, utilizando anticorpo monoclonal (AcM) anti-aflatoxina B1 produzido in vitro por cultivo da linhagem de hibridoma AF4 Sessenta amostras de lotes de amendoim fornecidos por indústria de processamento localizada na região de Marília-SP (n = 42 amendoim não blancheado e n = 18 amendoim blancheado) foram analisados quanto à umidade, atividade de água e AFB1 Cada lote representou cinco toneladas de amendoim da cultivar IAC Runner 886, da safra 214 / 15 e 215 / 16 O plano de amostragem foi realizado segundo estabelecido pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária – ANVISA A validação intra-laboratorial apresentou boa linearidade (R2 = ,9993), limite de detecção e quantificação de 1,13 ng/g e 3,59 ng/g, respectivamente, com taxas médias de recuperação de AFB1 de 14,4; 11,7 e 17,% para as concentrações de 4, 1 e 2 ng/g (CV de 4,9; 7,9 e ,7%), respectivamente O ic-ELISA mostrou boa precisão, expressa pela repetibilidade através da precisão intracorrida (CV= 1,87%) e precisão intermediária, através de precisão intercorrida (CV=6,75%) O teor de umidade variou de 4,3 a 7,89% (média de 6,9 % ± ,18), sendo que nenhuma amostra ultrapassou o limite máximo permitido (8,%) A atividade de água apresentou a variação de ,48 a ,69 Os resultados revelaram AFB1 em concentração variando de 1,13 a 29,2 ng/g No entanto, apenas duas amostras (3,3%) apresentaram níveis de contaminação acima de 2 ng/g, limite máximo estabelecido pela legislação Brasileira, sendo que 48,35% (n = 29) estavam abaixo do limite de quantificação Em relação a legislação da Comunidade Européia, 76% das amostras (n = 46) apresentaram níveis em conformidade com o limite máximo permitido para amendoim (8 ng/g) a ser submetido a triagem ou outro tratamento físico antes do consumo humano, sendo que destas, 35% (n = 21) estavam de acordo se for considerar amendoim processado pronto para consumo humano (2 ng/g) Concluindo, este ic-ELISA desenvolvido pode consistir numa ferramenta de uso fácil para monitoramento rápido na cadeia produtiva de amendoim, contribuindo para a redução de perigo através da detecção e segregação de lotes contaminadospt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: The São Paulo State stands out for the greater production of peanuts in Brazil, occupying 92% of the national production Peanut cultivation is susceptible to aflatoxin contamination These toxic secondary metabolites produced by fungi of the genus Aspergillus, present toxic and carcinogenic effects to human and animals The development of reliable, rapid and simple screening methodologies such as the enzyme-linked immunosorbent assay can be achieved using monoclonal antibody (mAb) The objective of this work was to develop, standardize and validate competitive indirect enzyme immunoassay (ic-ELISA) for the quantification of aflatoxin B1 in peanuts Peanuts from the Alta Paulista region, São Paulo State, were evaluated using anti-aflatoxin B1 monoclonal antibody (MAb) produced in vitro by culture of the hybridoma AF4 strain Sixty samples of peanut batches provided by processing industry located in the Marília-SP region (n = 42 non-blanched peanut and n = 18 blanched peanut) were analyzed for moisture, water activity and AFB1 Each lot represented five tons of peanuts from cultivar IAC Runner 886, from the 214/15 and 215/16 crops The sampling plan was carried out according to the National Sanitary Surveillance Agency (ANVISA) Intra-laboratory validation showed good linearity (R2 = 9999), limit of detection and quantification of 113 ng / g and 359 ng / g, respectively, with mean AFB1 recovery rates of 144; 117 and 17% for the concentrations of 4, 1 and 2 ng / g (CV of 49, 79 and 7%), respectively The ic-ELISA showed good accuracy, expressed by the repeatability through the intra-assay precision (CV = 187%) and intermediate accuracy, through inter-assay precision (CV = 675%) The moisture content ranged from 43 to 789% (mean 69% ± 18), and there was no sample exceeding the maximum permitted limit (8%) Water activity varied from 48 to 69 The results revealed AFB1 in concentration ranging from 113 to 292 ng / g However, only two samples (33%) had contamination levels above 2 ng / g, the maximum limit established by Brazilian legislation, and 4835% (n = 29) were below the limit of quantification In relation to European Community legislation, 76% of the samples (n = 46) showed levels in accordance with the maximum limit allowed for peanuts (8 ng / g) to be subjected to screening or other physical treatment before human consumption In total of samples, 35% of them were ready-to-eat peanut in according to European Community (2 ng / g) In conclusion, this ic-ELISA developed may consist of an easy tool for rapid monitoring in the peanut production chain, contributing to the reduction of danger through the detection and segregation of contaminated lotspt_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Ciência de Alimentos) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciência de Alimentospt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/15958
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenameCiência de Alimentospt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Agráriaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Ciência de Alimentospt_BR
dc.subjectAflatoxinapt_BR
dc.subjectMicotoxinaspt_BR
dc.subjectAnticorpos monoclonaispt_BR
dc.subjectAmendoimpt_BR
dc.subjectImunoensaiopt_BR
dc.subjectAflatoxinspt_BR
dc.subjectMycotoxinspt_BR
dc.subjectMonoclonal antibodiespt_BR
dc.subjectPeanutpt_BR
dc.titleImunoensaio ic-ELISA para aflatoxina : desenvolvimento, padronização e validação visando análise em amendoimpt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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