Análise da expressão dos genes nodC e nodG de Rhizobium tropici sob indução com flavonóides pela técnica de PCR quantitativo
| dataload.collectionmapped | 02 - Mestrado - Microbiologia | pt_BR |
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| dc.contributor.advisor | Hungria, Mariangela [Orientador] | pt_BR |
| dc.contributor.author | Oliveira, Luciana Ruano de | pt_BR |
| dc.contributor.banca | Marcelino, Francismar Corrêa | pt_BR |
| dc.contributor.banca | Rodrigues, Elisete Pains | pt_BR |
| dc.contributor.coadvisor | Marcelino, Francismar Corrêa [Coorientadora] | pt_BR |
| dc.coverage.spatial | Londrina | pt_BR |
| dc.date.accessioned | 2024-05-01T12:13:02Z | |
| dc.date.available | 2024-05-01T12:13:02Z | |
| dc.date.created | 2009.00 | pt_BR |
| dc.date.defesa | 29.07.2009 | pt_BR |
| dc.description.abstract | Resumo: O estabelecimento da simbiose rizóbio-leguminosa inicia-se com a excreção, pela planta hospedeira, de compostos de ação quimiotática sobre o rizóbio, facilitando a colonização rizosférica e estimulando o crescimento da bactéria Geralmente, estes compostos excretados são açúcares, aminoácidos e ácidos dicarboxílicos, que promovem a adesão dos rizóbios aos pelos radiculares das plantas Simultaneamente a esta adesão, tem início uma troca de sinais moleculares entre o microssimbionte e a planta hospedeira, que libera compostos fenólicos, principalmente flavonóides, responsáveis pela indução da transcrição de genes bacterianos essenciais à nodulação (genes nod, nol e noe) Os rizóbios produzem, então, por meio dos genes de nodulação, os fatores de nodulação (fatores Nod), que são oligossacarídeos lipoquitínicos (LCOs) que induzem modificações radiculares no estágio de pré-infecção, essenciais à infecção do rizóbio para a formação do nódulo e posterior fixação do nitrogênio (N2) O gene nodC é responsável pela biossíntese da estrutura básica do fator Nod, mais especificamente, é responsável pelo controle da etapa de elongação da cadeia principal oligossacarídica Já o gene nodG é um gene específico do hospedeiro (hsn), responsável pela modificação no esqueleto oligossacarídico do fator Nod Nesste estudo foi reportadarelatada a resposta transcricional dos genes nodC e nodG na estirpe PRF 81 de Rhizobium tropici, após indução com naringenina e exsudato de sementes de feijão, pela técnica de PCR quantitativo (RT-qPCR) Deste modo, diferentes tratamentos de indução dos genes nod foram realizados No primeiro experimento, os genes nodC e nodG foram induzidos com naringenina ou exsudato de sementes de feijão por um período de 48 h Já no segundo experimento, após as células bacterianas atingirem a fase exponencial de crescimento, foi realizado o processo de indução dos genes nod, sendo aplicados os seguintes tempos: 5 min, 15 min, 1 h, 4 h e 8 h Em seguida, procedeu-se à extração do RNA total de todas as culturas Os níveis de expressão gênica diferencial foram calculados aplicando-se o método 2-??Ct (Livak and Schmittgen, 21) e a análise dos dados foi feita por estatística descritiva, onde a reprodutibilidade e precisão dos valores de RQ obtidos foram estimados pelos desvios padrão (SD) e coeficiente de variação (CV%) em cada corrida e entre as corridas Também foi utilizado o programa REST 28 (Relative Expression Software Tool), versão 27 (Pfaffl et al, 22; http://wwwgene-quantificationinfo), o qual testa as diferenças para significância através de um teste randômico, baseado em iterações Em todas as reações foi utilizado o gene ribossômico 16S como normalizador Os resultados da quantificação relativa mostraram que, após cinco minutos5 min de incubação, ambos os genes foram significativamente induzidos pelo exsudato, com valores 121,97 e 14,86 superiores ao controle, respectivamente Níveis de expressão muito inferiores foram observados na presença de naringenina, além disso, a expressão máxima na presença desse indutor foi verificada somente após 8 h de incubação Esses resultados sugerem que o exsudato de sementes de feijão revelam maior potencial para uma imediata indução dos genes nod em R tropici PRF 81 | pt_BR |
| dc.description.abstractother1 | Abstract: The establishment of rhizobia-legume symbiosis begins with the excretion by the host plant of compounds with chemotatic activity to the rhizobia, facilitating the rhizospheric colonization and stimulating bacterial growth In general these excreted compounds are sugars, amino acids and dicarboxylic acids that promote the attachment of the rhizobia to the plant root hairs Simultaneously to this attachment, an exchange of molecular signals between the microsymbiont and the host plant starts, with the plant releasing phenolic compounds, mainly flavonoids, responsible for the induction of the transcription of bacterial nodulation genes (nod, nol and noe genes) Following, rhizobia releases the nodulation factors (Nod factors) that are lipochitin oligosaccharides (LCOs) responsible for the changes in the early stages of the root infection, facilitating the infection of rhizobia that will lead to nodule formation and nitrogen fixation The nodC gene is responsible for the biosynthesis of the basic structure of the Nod factor, more especifically, it is responsible for controlling the phase of elongation of the oligosaccharides backbone The nodG gene is a host-specific gene (hsn), responsible for modification in the oligosaccharide backbone of the Nod factor This study reports the transcriptional response of nodC and nodG genes of strain PRF 81 of Rhizobium tropici, after induction with naringenin and common bean exudate, evaluated by the quantitative PCR technique (RT-qPCR) Different gene induction treatments were applied In the first experiment, nDeste nodC and nodG genes were induced with naringenin or seed exudates by 48 h In the second experiment, after bacterial cells reached the exponential phase of growth, induction was achieved by the incubation with naringenin or seed exudates in different periods of time: 5 min, 15 min, 1 h, 4 h e 8 h Following, total RNA was extracted from all cultures The levels of differential gene expression were estimated by the method of 2-??Ct (Livak and Schmittgen, 21) and the analyses of the data was performed by using descriptional statistics, with the reproducibility and precision of the RQ values being estimated by the standard deviation (SD) and the coefficient of variatio (CV%) obtained in each assay and among the asssays The REST 28 (Relative Expression Software Tool), versão 27 (Pfaffl et al, 22; http://wwwgene-quantificationinfo) was also used, to test the statistical significance by means of a random test base on interactions In all reactions the 16S rRNA gene was used as a normalizer The results of relative quantification have shown that, after 5 min of incubation, both genes were significantly induced by the exudates, with values of 121,97- and 14,86-fold higher than the control, respectively Lower levels of expression were observed in the presence of naringenin; furthermore, maximum expression in the presence of this inducer was verified only after 8 h of incubation These results suggest that common bean seed exudates have a higher potential for a prompt induction of nod gene in R tropici strain PRF 81 This study reported the transcriptional response of nodC and nodG genes of Rhizobium tropici strain PRF 81 to naringenin and beans seeds exudate, by the RT-qPCR technique After five minutes of incubation, both genes were significantly induced by the exudate In contrast, naringenin was not efficient in inducing these genes in any of the times evaluated These results suggest that the beans seeds exudate show a higher potential for immediate induction of nod genes in Rhizobium tropici PRF 81 | pt_BR |
| dc.description.notes | Dissertação (Mestrado em Microbiologia) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Microbiologia | pt_BR |
| dc.identifier.uri | https://repositorio.uel.br/handle/123456789/9972 | |
| dc.language | por | |
| dc.relation.coursedegree | Mestrado | pt_BR |
| dc.relation.coursename | Microbiologia | pt_BR |
| dc.relation.departament | Centro de Ciências Biológicas | pt_BR |
| dc.relation.ppgname | Programa de Pós-Graduação em Microbiologia | pt_BR |
| dc.subject | Microbiologia agrícola | pt_BR |
| dc.subject | Microorganismos fixadores de nitrogênio | pt_BR |
| dc.subject | Rizóbio | pt_BR |
| dc.subject | Agricultural microbiology | pt_BR |
| dc.subject | Micro-organisms, Nitrogen-fixing | pt_BR |
| dc.subject | Beans | pt_BR |
| dc.subject | Rhizobium | pt_BR |
| dc.subject | Phaseolus vulgaris | pt_BR |
| dc.title | Análise da expressão dos genes nodC e nodG de Rhizobium tropici sob indução com flavonóides pela técnica de PCR quantitativo | pt_BR |
| dc.type | Dissertação | pt_BR |
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