Alterações celulares induzidas por tratamento com selenito de sódio em linhagem HaCaT (não-tumoral)

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dataload.collectionmapped02 - Mestrado - Genética e Biologia Molecularpt_BR
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dc.contributor.advisorMantovani, Mário Sérgio [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorBonfim, Natanael Endrew Souto Maior Torrespt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T15:14:43Z
dc.date.available2024-05-01T15:14:43Z
dc.date.created2017.00pt_BR
dc.date.defesa21.02.2017pt_BR
dc.description.abstractResumo: Diversos estudos indicam o selenito de sódio (uma forma inorgânica do micronutriente selênio) como um composto com potencial para o tratamento do câncer Análises em linhagens de células tumorais têm demonstrado a ação apoptótica, anti-carcinogênica e quimiopreventiva deste composto No entanto, o seu mecanismo de ação em linhagens de células não-tumorais ainda é pouco compreendido, sendo este, um importante requisito para o desenvolvimento de novas drogas As células de linhagem não-tumoral de queratinócitos –HaCat, têm se mostrado um excelente modelo para estudos toxicológicos Assim, este estudo teve como objetivo avaliar o potencial citotóxico (ensaio do MTT), a genotoxicidade (ensaio do cometa) e o mecanismo de ação (expressão gênica por qRT-PCR) do selenito de sódio em células HaCat, e analisar os seus efeitos na membrana celular, interferência no ciclo celular e indução de apoptose por citometria de fluxo Os resultados demonstram que o tratamento com selenito de sódio por 24h de exposição apresentou citotóxicidade a partir da concentração de 1µM, apresentando alterações no padrão morfológico das células com o aparecimento de grânulos citoplasmáticos, porém não apresentou efeito genotóxico Os dados obtidos por meio da citometria de fluxo revelaram que o selenito de sódio foi indutor de danos na membrana celular, de apoptose, e interfere no ciclo celular Em 12h de tratamento com 1 µM do selenito de sódio, notou-se redução significativa na expressão dos genes mTOR e ATR e um aumento na expressão do gene PUMA em relação ao controle Entretanto, não foi encontrado alteração significativa na expressão das caspases (CASP 3, CASP 7, CASP 8 e CASP 9) bem como dos genes PARP 1, BIRC 5, BECN 1 e c-MYC, o que indica que o selenito de sódio induz a apoptose por mecanismo independente de caspases em células HaCat Além disso, os genes analisados relacionados ao estresse oxidativo (CATB, GPX 1 e SOD 1), e os demais envolvidos no dano e reparo do DNA (ATM, GADD 45A, H2AX e MDM 2) e no ciclo celular (CCNA 1, CCNB 1, CCNB 2, CCND 1, CHK 1, CHK 2, p53 e p21) não apresentaram alteração significativa quando comparados com o controle Através da análise de cinética celular em tempo real notou-se que o selenito de sódio interfere na proliferação de queratinócitos por, pelo menos, 72h após o tratamento Com base nos efeitos relatados, pode-se inferir que o selenito de sódio apresenta um efeito tóxico para as células não-tumorais em concentrações que são semelhantes a testes em linhagens células tumorais, alterando o padrão morfológico e a curva de proliferação celular, modulando o padrão de expressão gênica induzindo a célula à apoptose mediado pelo PUMApt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Several studies indicate sodium selenite (an inorganic form of the selenium micronutrient) as a compound with potential for the treatment of cancer Analyzes in tumor cell lines there are demonstrated the apoptotic, anti-carcinogenic and chemopreventive action of this compound However, its mechanism of action in non-tumor cell lines is still poorly understood, and this is an important requirement for the development of new drugs Non-tumor cell lines of keratinocytes-HaCat, have been shown to be an excellent model for toxicological studies This study evaluated the cytotoxic potential (MTT assay), genotoxicity (comet assay) and mechanism of action (qRT-PCR gene expression) of sodium selenite in HaCat cells, and to analyze its effects in the cell membrane, interference in the cell cycle and induction of apoptosis by flow cytometry The results show that treatment with sodium selenite for 24h was cytotoxic from the concentration of 1 µM, presenting changes in cell morphology with the appearance of cytoplasmic granules, but did not resulted in genotoxic effect The flow cytometry data showed the sodium selenite was inducer of cell membrane damage, apoptosis, and interferes with the cell cycle In 12h treatment sodium selenite 1 µM, significant reduction in mTOR and ATR gene expression and an increase in PUMA gene expression was observed in relation to the control However, there was no significant change in the expression of caspases (CASP 3, CASP 7, CASP 8 and CASP 9) as well as PARP 1, BIRC 5, BECN 1 and c-MYC genes, indicating that sodium selenite induces Apoptosis by caspase-independent mechanism in HaCat cells In addition, the analyzed genes related to oxidative stress (CAT B, GPX 1 and SOD 1), and the others involved in DNA damage and repair (ATM, GADD 45A, H2AX and MDM 2) and in the cell cycle (CCNA 1, CCNB 1, CCNB 2, CCND 1, CHK 1, CHK 2, p53 and p21) showed no significant change when compared to the control Through the real-time cell kinetics analysis we noticed that sodium selenite interferes in the proliferation of HaCat for at least 72h after treatment Our results suggest that sodium selenite has a toxic effect to non-tumor cells at such like concentration in tumor cell lines tests, altering the morphological arrangement and the cell proliferation curve, modulating the pattern of gene expression , and inducing the cell to PUMA-mediated apoptosispt_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Genética e Biologia Molecular) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética e Biologia Molecularpt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/16777
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenameGenética e Biologia Molecularpt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Biológicaspt_BR
dc.relation.institutionnameEMBRAPApt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Genética e Biologia Molecularpt_BR
dc.subjectAntiproliferaçãopt_BR
dc.subjectMecanismo de ação (Bioquímica)pt_BR
dc.subjectSelenito de sódiopt_BR
dc.subjectTratamento de câncerpt_BR
dc.subjectCitotoxicidadept_BR
dc.subjectMechanism of action (Biochemistry)pt_BR
dc.titleAlterações celulares induzidas por tratamento com selenito de sódio em linhagem HaCaT (não-tumoral)pt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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