Detecção e caracterização molecular de Cryptosporidium spp. e Giardia spp. em água bruta e tratada de uma estação pública de tratamento de água
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Almeida, Jonatas Campos de
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Resumo
Resumo: A água é um dos principais veículos de patógenos que causam doenças na população Em muitos países em desenvolvimento a infraestrutura para fornecimento de água potável é incompleto ou ausente e existem elevados níveis endêmicos de doenças transmitidas pela água Os protozoários zoonóticos Cryptosporidium spp e Giardia spp possuem uma grande capacidade de impactos negativos na população humana e animal Ambas as espécies resistem ao tratamento convencional da água O risco representado pela presença de Cryptosporidium e Giardia tornou-se uma grande preocupação para as autoridades sanitárias e empresas responsáveis pelo fornecimento de água potável para consumo humano e animal A Portaria 2914/11 do Ministério da Saúde exige um padrão de ausência desses dois protozoários em águas destinadas ao consumo humano O objetivo desse estudo foi detectar Cryptosporidium spp e Giardia spp em água bruta e tratada em um sistema público de tratamento de água, situado no município de Londrina, Paraná, Brasil Entre setembro de 212 e setembro de 213, foram coletadas amostras de água bruta (3L) e água tratada (1L), quinzenalmente, em um total de 48 amostras As amostras foram examinadas por meio da Técnica da Membrana Filtrante, utilizando-se membranas com 47mm de diâmetro e 1,2µm de porosidade e um kit portátil de filtração à vácuo ajustado para 4L/min O material retido na membrana foi mecanicamente extraído pela raspagem da sua superfície, eluído em solução de Tween 8 a 1%, centrifugado duas vezes e o sedimento resultante utilizado para as analises A partir das amostras foi realizada a imunofluorescência direta para oocistos de Cryptosporidium spp e cistos de Giardia spp, utilizando-se o kit comercial Merifluor® (Meridian Bioscience) Realizou-se a extração de DNA com o kit comercial NucleoSpin Tissue® (Macherey-Nagel) e a reação de nested-PCR (n-PCR) para a detecção dos protozoários e eletroforese em gel de agarose Os genes alvos foram o 18S rRNA para Cryptosporidium (produto final de 819-825 pares de bases) e 16S rRNA para Giardia (produto final de 292-297 pares de bases) Na imunofluorescência as amostras de água bruta foram positivas, sendo detectada Giardia spp em 2/24 (833%) amostras analisadas Na n-PCR, 6/24 (25%) das amostras de água bruta foram positivas para Giardia spp e 2/24 (833%) para Cryptosporidium spp Das amostras de água tratada, na n-PCR, 1/24 (416%) foi positiva para Giardia spp e todas foram negativas para Cryptosporidium spp O sequenciamento demonstrou C parvum em ambas as amostras de água bruta Após o sequenciamento foi identificada DNA de Giardia duodenalis em duas amostras de água bruta Nas três amostras de água bruta e na amostra de água tratada inicialmente positivas à n-PCR, após o sequenciamento, demonstrou-se que o DNA pertencia à bactéria ambiental Nakamurella multipartita Houve correlação moderada entre turbidez (r = 5422; p = 61) e cor (r = 4491; p = 277) e a presença de Cryptosporidium spp na água bruta, e entre turbidez (r = 589; p = 29) e a presença de Giardia spp em água bruta A presença desses protozoários em águas de manancial de abastecimento aponta a real necessidade de monitoramento e especial atenção das companhias de tratamento de água da região, considerando a Portaria 2914/11 do Ministério da Saúde
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Palavras-chave
Água, Análise, Protozoário, Água, Zoonoses, Water, Protozoa, Public health, Water, Analysis