Hesperidina-metil-chalcona interage com o resíduo Ser276 da subunidade p65 do NFkB e inibe a dor e a inflamação em modelo de artrite e a ativação de macrófagos RAW 264.7 induzidos por zymosan

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dc.contributor.advisorVerri Júnior, Waldiceu Aparecido
dc.contributor.authorOliveira, Fernanda Soares Rasquel de
dc.contributor.bancaDionísio, Andressa de Freitas Mendes
dc.contributor.bancaFerraz, Camila Rodrigues
dc.coverage.extent74 p.
dc.coverage.spatialLondrina
dc.date.accessioned2024-07-30T11:28:12Z
dc.date.available2024-07-30T11:28:12Z
dc.date.issued2020-03-09
dc.description.abstractO zymosan é um polissacarídeo derivado do fungo Saccharomyces cerevisiae. A administração deste polissacarídeo na cavidade articular é capaz de induzir artrite em camundongos. A hesperidina-metil-chalcona é um flavonoide do grupo das flavanonas com eficácia terapêutica demonstrada por diversos estudos. Apresenta efeitos analgésicos frente à estímulos inflamatórios, oferece proteção contra radiação UVB, inibe o processo inflamatório e estresse oxidativo. Todavia, seus efeitos sobre a ativação de macrófagos RAW 264.7 e a inflamação articular induzidas pelo zymosan ainda são desconhecidos. Portanto, o presente estudo teve como objetivo avaliar os efeitos e mecanismos de ação do flavonoide hesperidina-metil-chalcona em modelo de artrite induzida por zymosan. Para isso, inicialmente foi realizada uma curva dose resposta para determinar a dose mais eficaz em reduzir a hiperalgesia mecânica. Em seguida, foram avaliados os efeitos do tratamento com a dose mais eficaz de hesperidina-metil-chalcona sobre o edema articular e recrutamento celular (contagem total e diferencial dos leucócitos, além de análise histopatológica), ensaios colorimétricos de GSH, FRAP, ABTS e NBT como parâmetros de estresse oxidativo. A produção das citocinas IL-33, TNF-α e IL-6 foi determinada por ELISA e expressão de RNAm para gp91phox e HO-1 por RT-qPCR. Ademais, in vitro, foi quantificada a produção de IL-33, TNF-α e IL-6, presença de EROs (ensaio DAF2DA para EROs intracelular) e ativação do NFκB. Os resultados obtidos na curva dose-resposta demonstraram que o pré-tratamento com a dose de 100 mg/kg da hesperidina-metil chalcona apresentou maior eficácia em reduzir a dor inflamatória induzida por zymosan. O tratamento com a dose previamente determinada foi eficaz na redução do edema articular, do recrutamento total e diferencial de leucócitos, reduziu significativamente in vitro e in vivo os níveis das citocinas pró-inflamatórias IL-33, TNF α e IL-6 e do infiltrado celular nas análises histopatológicas. Observou-se também aumento na capacidade antioxidante pelos ensaios de GSH, FRAP e ABTS além de diminuir a produção de ânion superóxido pelo ensaio NBT, expressão de gp91phox e aumento na expressão de HO-1. Também foi observada uma redução na geração de EROs totais e na ativação do NFκB, in vitro. Além disso, por análise molecular in silico, a interação da hesperidina-metil-chalcona com a Ser276 da subunidade p65, um resíduo de aminoácido de interesse para a ativação do NFκB, sugere um dos mecanismos pelo qual esse flavonoide promove inibição do processo inflamatório. Esta é a primeira demonstração da interação direta da hesperidina-metil-chalcona com o NFκB. Dessa forma, esse estudo demonstrou, pré-clinicamente, o potencial analgésico e anti-inflamatório da hesperidina-metil-chalcona em modelo de artrite induzida por zymosan e in vitro em macrófagos RAW 264.7.
dc.description.abstractother1Zymosan is a polysaccharide derived from the fungus Saccharomyces cerevisiae. Intra-articular injection of this polysaccharide induces inflammatory arthritis in mice. Hesperidin-methyl-chalcone, member of the flavanone group of flavonoids, with therapeutic efficacy demonstrated by several studies. It presents analgesic effects in acute models of pain, protects against UVB radiation, and inhibits the inflammatory process and oxidative stress. However, its effects on RAW 264.7 macrophage activation and zymosan-induced arthritis are still unknown. Therefore, the present study aims to evaluate the effects and mechanisms of action of the flavonoid hesperidin-methyl-chalcone in a zymosan-induced arthritis model. A dose-response curve was initially performed to determine the most effective dose in reducing pain in the arthritis model by testing the mechanical hyperalgesia. The effects of treatment with the best hesperidin-methyl-chalcone dose were evaluated on joint edema and leukocyte recruitment (determination of total and differential leukocyte count, and histopathological analysis). GSH, FRAP, ABTS, and NBT assays were evaluated as parameters of oxidative stress using colorimetric methods. Production of cytokines such as IL-33, TNF-α, and IL-6 were determined by ELISA and mRNA expression of gp91phox and HO-1 by RT-qPCR. Furthermore, in vitro production of IL-33, TNF-α and IL-6, presence of intracellular ROS (DAF2DA, total ROS determination) and activation of NFκB was quantified. The results on the dose-response curve demonstrated that the pre-treatment with 100 mg/kg hesperidin-methyl-chalcone dose reduced more effectively the inflammatory pain induced by zymosan. Also, hesperidin-methyl chalcone treatment was effective in reducing joint edema, as well as reducing leukocyte recruitment, and proinflammatory cytokine levels IL-33, TNF-α, and IL-6 in vivo and in vitro. An increase in antioxidant capacity was also observed as per GSH, FRAP, and ABTS assays and HO-1 mRNA expression. We also observed reduction in superoxide anion production as observed by lower levels in the NBT assay as well as a decrease in gp91phox . In vitro, we also observed a reduction in total ROS production and in NFκB activation in macrophages. Furthermore, by performing in silico analysis (molecular docking), we found interaction of hesperidin-methyl-chalcone with Ser276 residue of the NFκB p65 subunit. It suggests that hesperidin-methyl-chalcone directly interacts with Ser276 of p65, an amino acid residue of interest for NFκB activation. To our knowledge, this is the first demonstration that hesperidin-methyl-chalcone directly interacts with NFκB, which may contribute to suppress pathological inflammation. Thus, this study demonstrated, pre-clinically, the analgesic and anti-inflammatory potential of hesperidin-methyl-chalcone in a zymosan-induced arthritis model.
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/17097
dc.language.isopor
dc.relation.departamentCCB - Departamento de Biologia Geral
dc.relation.institutionnameUniversidade Estadual de Londrina - UEL
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Patologia Experimental
dc.subjectHiperalgesia
dc.subjectFlavonoide
dc.subjectAntioxidante
dc.subjectNocicepção
dc.subjectIn silico
dc.subjectArtrite
dc.subjectInflamação
dc.subjectDor
dc.subject.capesCiências da Saúde - Medicina
dc.subject.keywordsHyperalgesia
dc.subject.keywordsFlavonoid
dc.subject.keywordsAntioxidant
dc.subject.keywordsNociception
dc.subject.keywordsIn silico
dc.subject.keywordsArthritis
dc.subject.keywordsInflammation
dc.subject.keywordsPain
dc.titleHesperidina-metil-chalcona interage com o resíduo Ser276 da subunidade p65 do NFkB e inibe a dor e a inflamação em modelo de artrite e a ativação de macrófagos RAW 264.7 induzidos por zymosan
dc.title.alternativeHesperidin methyl chalcone interacts with NF?B Ser276 and inhibits zymosan-induced joint pain and inflammation, and RAW 264.7 macrophage activation
dc.typeDissertação
dcterms.educationLevelMestrado Acadêmico
dcterms.provenanceCentro de Ciências Biológicas

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