Avaliação da eficácia de uma vacina de DNA (ROP18+SAG1) contra Toxoplasma gondii em suínos

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dc.contributor.advisorGarcia, João Luis
dc.contributor.authorCandeias, Ana Paula Molinari
dc.contributor.bancaZangirolamo, Amanda Fonseca
dc.contributor.bancaWatanabe, Michelle Igarashi
dc.contributor.bancaFernandes, Nelson Luis Mello
dc.contributor.bancaCardim, Sérgio Tosi
dc.contributor.coadvisorBarros, Luiz Daniel de
dc.coverage.extent80 p.
dc.coverage.spatialLondrina
dc.date.accessioned2026-09-17T17:51:23Z
dc.date.available2026-09-17T17:51:23Z
dc.date.issued2025-02-28
dc.description.abstractO objetivo do presente estudo foi avaliar a resposta imune humoral e a proteção contra a formação de cistos teciduais de Toxoplasma gondii em suínos imunizados, pelas vias intradérmica (ID) e intramuscular (IM), com uma vacina de DNA (ROP18 e SAG1). Suínos (n=14) foram divididos em quatro grupos (G), animais que compõem o G1 (n=4) receberam por via ID e os do G2 (n=3) por via IM: 300µg da vacina (150µg ROP18+pcDNA3.1 e 150µg SAG1+pcDNA3.1); animais do G3 (n=4) receberam por via IM pcDNA 3.1 (300µg); por fim, animais do G4 (n=3) receberam apenas solução salina (0,9%) por via IM. Todos os grupos receberam levamisole 2,0% (v/v) como adjuvante. As imunizações foram realizadas nos dias (D) 0, 14, 35 e 56. O desafio foi realizado no dia 70 com oocistos esporulados da cepa ME49 (~4x103) de T. gondii. Os animais foram examinados clinicamente todos os dias e amostras de sangue foram coletadas até o momento do abate (D0, D14, D35 e D56, D70, D84 e D100). A resposta humoral foi avaliada por meio da RIFI (IgG) e do ELISA (IgM e IgG). Tecidos dos suínos (cérebro, coração, diafragma, masseter, língua, pulmão e retina) foram coletados no abate para a realização de bioensaio em camundongos, PCR e qPCR. Manifestações clínicas foram observadas a partir do quarto DPD (prostração, apatia, anorexia e hipertermia). Os suínos apresentaram resultado positivo na RIFI somente após o desafio (D84 e D100). Diferenças estatísticas nos níveis de IgM e IgG entre os grupos foram avaliadas pelo teste de ANOVA two way (p = 0,05). No bioensaio, Qui-quadrado foi usado para mostrar diferença significativa em relação ao número de cistos teciduais detectado entre os grupos (p = 0,05). ELISA-IgM e ELISA-IgG apresentaram diferenças significativas entre os grupos nos dias 70, 84 e 100. G1 e G2 permaneceram com níveis mais elevados de IgM até o fim do experimento. Diferença significativa de IgG antes do desafio foi notada somente entre G2 vs G3 (P < 0.005). Em relação ao bioensaio, PCR e qPCR, um suíno do G1 apresentou resultados negativos em todas as análises. Os animais do G1 (50%), G2 (67%) e G3 (83%) foram positivos no bioensaio em camundongos (detecção de cistos por microscopia). Os valores estimados da Fração de Prevenção (FP) contra a formação de cistos teciduais foram de 40% (G1 vs G3) e 20% (G2 vs G3). Não houve diferença significativa entre G1 vs G2 (p=0,34), G1 vs G3 (p=0,22) e G2 vs G3 (p=0,37). Apesar disso, foi observada eficácia na redução do número de cistos teciduais nos grupos vacinados. Conclui-se que manutenção dos níveis de IgM nos animais imunizados sugere a ocorrência de imunidade duradoura. Os animais vacinados pela via IM apresentaram melhor resposta imune humoral com diferença significativa de IgG antes do desafio. No entanto, os animais vacinados pela via ID apresentaram melhores resultados no bioensaio com FP de 40% em relação à formação de cistos teciduais.
dc.description.abstractother1The aim of this study was to evaluate the humoral immune response and protection against the presence of Toxoplasma gondii in the tissues of pigs immunized intradermally (ID) and intramuscularly (IM) with a DNA vaccine (ROP18 and SAG1). Pigs (n=14) were divided into four groups (G), with G1 animals (n=4) receiving via ID and G2 animals (n=3) via IM: 300µg of the vaccine (150µg ROP18+pcDNA3.1 and 150µg SAG1+pcDNA3.1); G3 animals (n=4) received pure pcDNA 3.1 (300µg) IM; finally, G4 animals (n=3) received only saline solution (0.9%) IM. All groups received levamisole 2.0% (v/v) as an adjuvant. Immunizations were carried out on days (D) 0, 14, 35 and 56. The challenge was carried out on day 70 with sporulated oocysts of the ME49 strain (~4x103) of T. Gondii. The animals were clinically examined every day and blood samples were collected until the time of slaughter (D0, D14, D35 and D56, D70, D84 and D100). The humoral response was assessed using RIFI (IgG) and ELISA (IgM and IgG). Tissues from the pigs (brain, heart, diaphragm, masseter, tongue, lung and retina) were collected at slaughter for bioassay in mice, PCR and qPCR. Clinical manifestations were observed from the fourth day post-challenge onwards (prostration, apathy, anorexia and hyperthermia). The pigs tested positive for RIFI only after challenge (D84 and D100). Statistical differences in IgM and IgG levels between the groups were assessed using the two-way ANOVA test (p = 0.05). In the bioassay, Chi-square was used to show a significant difference in relation to the number of tissue cysts detected between the groups (p = 0.05). ELISA-IgM and ELISA-IgG showed significant differences between the groups on days 70, 84 and 100. G1 and G2 remained with higher IgM levels until the end of the experiment. A significant difference in IgG before challenge was observed only between G2 and G3 (P < 0.005). By bioassay, PCR and qPCR, one pig from G1, showed negative results in all the analyses. Animals in G1 (50%), G2 (67%) and G3 (83%) were positive in the mouse bioassay (detection of cysts by microscopy). The estimated Prevention Fraction (PF) values against the formation of tissue cysts obtained were 40% (G1 vs G3) and 20% (G2 x G3). There was no significant difference between G1 vs G2 (p=0.34), G1 vs G3 (p=0.22) and G2 vs G3 (p=0.37). Despite this, efficacy was observed in reducing the number of tissue cysts in the vaccinated groups. In conclusion, the maintenance of IgM levels in immunized animals suggests the occurrence of lasting immunity. The animals vaccinated by IM showed a better humoral immune response with a significant difference in IgG before challenge. However, the animals vaccinated via ID showed better results in the bioassay with a PF of 40% in relation to the formation of tissue cysts.
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/19964
dc.languagepor
dc.language.isopor
dc.relation.departamentCCA - Departamento de Clínicas Veterinárias
dc.relation.institutionnameUniversidade Estadual de Londrina - UEL
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Ciência Animal
dc.subjectToxoplasmose
dc.subjectBradizoítos
dc.subjectROP18
dc.subjectSAG1
dc.subjectLevamisole
dc.subjectSuínos
dc.subjectToxoplasma gondii
dc.subjectVacinas de DNA
dc.subjectImunologia
dc.subject.capesCiências Agrárias - Medicina Veterinária
dc.subject.cnpqCiências Agrárias - Medicina Veterinária
dc.subject.keywordsToxoplasmosis
dc.subject.keywordsBradyzoites
dc.subject.keywordsROP18
dc.subject.keywordsSAG1
dc.subject.keywordsLevamisole
dc.subject.keywordsPigs
dc.subject.keywordsToxoplasma gondii
dc.subject.keywordsDNA vaccines
dc.subject.keywordsImmunology
dc.titleAvaliação da eficácia de uma vacina de DNA (ROP18+SAG1) contra Toxoplasma gondii em suínos
dc.title.alternativeEvaluation of the efficacy of a DNA vaccine (ROP18+SAG1) against Toxoplasma gondii in pigs
dc.typeTese
dcterms.educationLevelDoutorado
dcterms.provenanceCentro de Ciências Agrárias

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