Atividade antitumoral in vitro do 3,3’,5,5’-tetrametoxibifenil-4,4’-diol sobre as linhagens HuH7.5 e HepG2/C3A de carcinoma hepatocelular humano

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dc.contributor.advisorPavanelli, Wander Rogério
dc.contributor.authorInoue, Fabricio Seidy Ribeiro
dc.contributor.bancaBortoleti, Bruna Taciane da Silva
dc.contributor.bancaSapla, Milena Menegazzo Miranda
dc.coverage.extent77 p.
dc.coverage.spatialLondrina
dc.date.accessioned2024-10-16T11:42:45Z
dc.date.available2024-10-16T11:42:45Z
dc.date.issued2022-03-11
dc.description.abstractDentre os cânceres hepáticos primários, o carcinoma hepatocelular (CHC) é o mais incidente e agressivo, apresentando apenas 18% de sobrevida em 5 anos, baixa responsividade e recorrente resistência à quimioterapia devido a heterogeneidade molecular encontrada nos tumores. Neste contexto, a utilização de compostos fenólicos como alternativa terapêutica para o câncer tem sido o foco de muitos estudos devido às suas propriedades biológicas como antimutagenicidade, anti-inflamatória e antiproliferativa. O 3,3’,5,5’-tetrametoxibifenil-4,4’-diol (TMBP) é um composto biossintético obtido através da oxidação do 2,6-dimetoxifenol por meio da biotransformação enzimática. Em estudos prévios utilizando o TMBP, foi demonstrado sua capacidade antiproliferativa sobre a linhagem A549 (adenocarcinoma pulmonar). O presente trabalho propôs explorar a atividade antitumoral do TMPB sobre as linhagens HuH7.5 e HepG2/C3A (CHC), assim como os mecanismos de morte celular envolvidos. Inicialmente, foi avaliada a viabilidade celular das linhagens tratadas com o TMBP (12,5–150 µM) nos tempos de 24 e 48h por ensaio de MTT. Posteriormente foram calculadas as concentrações inibitórias mínimas de 50% (IC50), utilizadas para os experimentos seguintes. Para a confirmação do ensaio de viabilidade, foi realizado contagem através do método de exclusão azul de tripan. Para a análise dos efeitos celulares foram avaliadas as alterações morfológicas, ultraestruturais e capacidade de migração celular por microscopia eletrônica e ensaio de cicatrização de ferida. Como forma de avaliar as alterações metabólicas após tratamento com IC50 foram mensuradas espécies reativas de oxigênio (ERO) total for fluorescência, utilizando a sonda de diacetato de 2’,7’-diclorohidrofluoresceína (H2DCFDA), óxido nítrico (NO) pelo método de Griess, potencial de membrana mitocondrial, vacúolos autofágicos e gotículas lipídicas por métodos de fluorescência utilizando as marcações tetrametilrodamina (TMRE), monodansilcadaverina (MDC) e vermelho neutro (NR), respectivamente. A distribuição do ciclo celular também foi avaliada, juntamente com o ensaio de caracterização de morte celular por citometria de fluxo. O tratamento com TMBP reduziu a viabilidade celular em todas as concentrações testadas, chegando aos valores de IC50 de 68 e 50 µM em 24h para as linhagens HuH7.5 e HepG2/C3A, respectivamente, os quais foram utilizados para os seguintes experimentos. As células tratadas apresentaram migração comprometida, além de severas alterações morfológicas. O tratamento induziu aumento nos níveis de ERO e NO, despolarização da membrana mitocondrial e ativação de mecanismos de adaptação, como aumento da biosíntese de gotículas lipídicas e vacúolos autofágicos em ambas as linhagens, tais alterações foram validadas através das alterações ultraestuturais. Além disso o tratamento com TMBP promoveu similarmente nas duas linhagens a parada do ciclo celular na fase G2/M, e induziu a morte celular por apoptose. Desse modo, foi possível verificar a ação citotóxica e antiproliferativa direta do TMBP sobre as linhagens tumorais, indicando este composto como um candidato promissor ao desenvolvimento de uma droga antitumoral
dc.description.abstractother1Among primary liver cancers, hepatocellular carcinoma (HCC) is the most incident and aggressive, presenting only 18% 5-year survival, low responsivity and recurrent resistance to chemotherapy considering its molecular heterogeneity found in different tumors. In this context, the use of phenolic compounds as an alternative to cancer therapy has been the focus of several studies due to their biological properties as antimutagenicity, anti-inflammatory and antiproliferative. 3,3',5,5'-tetramethoxybiphenyl-4,4'-diol (TMBP) is a biosynthetic compound obtained by 2,6-dimethoxyphenol oxidation by enzymatic biotransformation. In previous studies with TMBP, was demonstrated its antiproliferative capacity against the A549 cell line (lung adenocarcinoma). This study has proposed exploring TMBP antitumoral activity on HuH7.5 and HepG2/C3A (HCC) cell lines, as well as involved cell death mechanisms. Initially was evaluated the cell viability of cells treated with TMBP (12.5–150 µM) for 24 and 48 hours by MTT assay. Subsequently, was calculated the minimum inhibitory concentration of 50% (IC50), used for the next experiments. To confirm the cell viability assay, a cell counting by trypan blue exclusion assay was performed. For cellular effects analysis were evaluated morphological, ultrastructural and cell migration alterations by electron microscopy and wound healing assay. As a way to evaluate metabolic alterations after treatment with IC¬50, was mensurated total reactive oxygen species (ROS), using a 2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate (H2DCFDA) probe, nitric oxide (NO) by Griess method, mitochondrial membrane potential, autophagic vacuoles and lipid droplets by tetramethylrhodamine (TMRE), monodansylcadaverine (MDC) and nile red (NR) staining, respectively. Cell cycle distribution was also evaluated, along with cell death assay by flow cytometry. Treatment with TMBP decreased cell viability in all concentrations tested, leading to IC50 values of 68 and 50 µM in 24 hours for HuH7.5 and HepG2/C3A cell lines, respectively, which were used for the following experiments. Treated cells presented severe morphological alterations and migration impairment. The treatment resulted in increased ROS and NO levels, mitochondrial membrane depolarization and activation of adaptation mechanisms, as increased autophagic vacuoles and lipid droplets biosynthesis in both lineages. Those alterations were validated through ultrastructural changes. Hence, TMBP treatment promoted similarly in both lines cell cycle arrest in the G2/M phase, as well as induced cell death by apoptosis. As demonstrated, it was possible to verify TMBP’s cytotoxic and antiproliferative activity against these tumoral cell lines, indicating this compound as a promising candidate to the development of an antitumoral drug
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/18070
dc.language.isopor
dc.relation.departamentCCB - Departamento de Ciências Patológicas
dc.relation.institutionnameUniversidade Estadual de Londrina - UEL
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Patologia Experimental
dc.subjectCarcinoma hepatocelular
dc.subjectTMBP
dc.subjectCompostos fenólicos
dc.subjectApoptose
dc.subjectPatologia experimental
dc.subject.capesCiências Biológicas - Biologia Geral
dc.subject.cnpqCiências Biológicas - Biologia Geral
dc.subject.keywordsHepatocellular carcinoma
dc.subject.keywordsTMBP
dc.subject.keywordsPhenolic Compounds
dc.subject.keywordsApoptosis
dc.titleAtividade antitumoral in vitro do 3,3’,5,5’-tetrametoxibifenil-4,4’-diol sobre as linhagens HuH7.5 e HepG2/C3A de carcinoma hepatocelular humano
dc.title.alternativeIn vitro antitumoral activity of 3,3’,5,5’-tetramethoxybiphenyl-4,4’-diol on HuH7.5 and HepG2/C3A lineages of human hepatocellular carcinoma
dc.typeDissertação
dcterms.educationLevelMestrado Acadêmico
dcterms.provenanceCentro de Ciências Biológicas

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