Semi-nested PCR para a detecção molecular do fungo Paracoccidioides brasiliensis

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dc.contributor.advisorVenâncio, Emerson José [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorKoishi, Andrea Cristinept_BR
dc.contributor.bancaSilva, Silvana Petrofeza dapt_BR
dc.contributor.bancaSaridakis, Halha Ostrenskypt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T11:40:59Z
dc.date.available2024-05-01T11:40:59Z
dc.date.created2009.00pt_BR
dc.date.defesa2008pt_BR
dc.description.abstractResumo: Paracoccidioides brasiliensis é um fungo termo-dimórfico e agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM), uma micose sistêmica endêmica na América Latina A PCM é rotineiramente diagnosticada pela observação direta das células do fungo, por cultura celular ou ainda por métodos sorológicos Entretanto, essas técnicas apresentam limitações que podem levar a atrasos para o início do tratamento ou mesmo a resultados falso negativos Neste estudo foi desenvolvida uma reação de semi-nested PCR para a detecção do DNA de P brasiliensis, utilizando a seqüência do DNA ribossomal como alvo Inicialmente, amostras de DNA de P brasiliensis (cepas Pb18 e LDR1) e de outros fungos patogênicos foram extraídas e usadas para se determinar o limite de detecção da reação e a ocorrência de reações cruzadas Para avaliar a reação de semi-nested, ela foi comparada com os métodos de cultivo e histopatologia quanto à capacidade de detecção de P brasiliensis Pb18 em amostras de tecidos de camundongos experimentalmente infectados E ainda, a reação desenvolvida neste trabalho foi utilizada para a detecção do fungo em amostras de biópsia bucal de pacientes com suspeita de PCM e solo de tocas de tatu e formigueiros Na tentativa de otimizar a reação foi desenvolvida uma semi-nested PCR em uma única etapa A semi-nested PCR mostrou-se específica para P brasiliensis e o limite de detecção foi de 2,5 pg de DNA ou 1 células do fungo No estudo comparativo a semi-nested PCR e a histopatologia foram positivas para todas as amostras de animais infectados, inclusive quando parafinadas, enquanto que a cultura foi positiva apenas para 6% das amostras A semi-nested PCR também foi positiva para as 4 amostras de pacientes com PCM e para duas amostras de solo, uma de toca de tatu e outra de formigueiro A semi-nested PCR em um tubo foi específica para P brasiliensis, porém, com um limite de detecção de ,25 ng de DNA Este estudo mostrou a alta sensibilidade e especificidade dessa nova reação de semi-nested PCR para a detecção molecular de P brasiliensis em amostras de biópsias, em tecidos embebidos em parafina e mesmo do solopt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Paracoccidioides brasiliensis is a thermally dimorphic fungus and the etiologic agent of paracoccidioidomycosis (PCM), a systemic mycosis endemic in Latin America PCM is routinely diagnosed by direct observation of fungi cells, by culture or serological tests However, these techniques present limitations that could result in delay for the beginning of treatment or even false negatives results In this study a semi-nested PCR assay for the detection of P brasiliensis was evaluated, using sequences of the rDNA as a target Initially, DNA samples of two P brasiliensis isolates (LDR1 and Pb18) and other pathogenic fungi were extracted and used to determine the limit of detection and cross-reactivity To evaluate the semi-nested PCR assay, it was compared to culture and histopathology methods in detecting P brasiliensis Pb18 in tissue samples of experimentally infected mice Furthermore, the assay developed in this study was used for the fungus detection in oral biopsy specimens of patients with a PCM suspect and in soil of armadillo’s burrow and ant-hill To improve the reaction a one tube semi-nested PCR was also padronized The semi-nested PCR assay was specific for P brasiliensis and the detection limit was 2,5 pg of DNA or 1 fungi cells In the comparative study, the semi-nested assay and histopathology were positive for all infected samples, including the paraffin-embedded ones, while only 6% were positive by cellular culture The semi-nested PCR assay was also positive for 4 PCM patients’ samples and in two environmental samples, one from an armadillo burrow and the other one from an ant-hill One tube semi-nested PCR was specific for P brasiliensis, however, with a detection limit of ,25 ng of DNA This study showed the high sensitivity and specificity of this new semi-nested PCR assay for the detection of P brasiliensis in fresh and paraffin-embedded tissues, and soilpt_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Patologia Experimental) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Patologia Experimentalpt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/8861
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenamePatologia Experimentalpt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Biológicaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Patologia Experimentalpt_BR
dc.subjectPatologia experimentalpt_BR
dc.subjectParacoccidioides brasiliensispt_BR
dc.subjectParacoccidioidomicosept_BR
dc.subjectExperimental pathologypt_BR
dc.subjectBrazilian blastomycosispt_BR
dc.titleSemi-nested PCR para a detecção molecular do fungo Paracoccidioides brasiliensispt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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