Expressão de citocinas e quantificação de oocistos por qPCR em gatos imunizados com proteína recombinante do Toxoplasma gondii

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dc.contributor.advisorGarcia, João Luis [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorGimenes, Ana Carolina Miurapt_BR
dc.contributor.bancaBogado, Alexey Leon Gomelpt_BR
dc.contributor.bancaCrhyssafidis, Andréas Lázarospt_BR
dc.contributor.bancaBreganó, Regina Mitsukapt_BR
dc.contributor.bancaHeadley, Selwyn Arlingtonpt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T13:12:49Z
dc.date.available2024-05-01T13:12:49Z
dc.date.created2018.00pt_BR
dc.date.defesa28.02.2018pt_BR
dc.description.abstractResumo: Toxoplasma gondii é um protozoário intracelular obrigatório causador da toxoplasmose, uma importante zoonose Os felídeos, dentre eles o gato doméstico, são hospedeiros definitivos do T gondii, neles ocorre a formação de oocistos eliminados nas fezes Visto que poucos estudos são focados em gatos, este teve como objetivo avaliar a expressão de citocinas (IL-6, IL-1, TNF-a, IFN-g) e quantificar oocistos pela técnica de qPCR em gatos imunizados com proteínas recombinantes rROP2 de T gondii e rHSP7 de Eimeria tenella Foram utilizados doze gatos, em 3 grupos; 4 animais cada G1: foi imunizado com 25 µg de rROP2, 25 µg de rHSP7 mais 2 µg de Quil-A; G2: recebeu 25 µg de E coli (vetor) mais 2 µg do Quil-A; G3: recebeu apenas solução salina; grupo controle Todas as doses imunizantes foram administradas nos dias , 21 e 42 do experimento pela via nasal O desafio foi feito no dia , com 6 cistos da cepa TgDoveBr8 (tipo II) Amostras de sangue foram coletadas de cada animal nos dias ,7,14, 21 e 35 pós infecção e fezes de todos os animais foram examinadas por 9 dias após o desafio pela técnica de Sheather (centrifugo-flutuação com exame microscópico) e pela qPCR No 7º dia pós infecção, biopsias de duodeno foram coletadas de seis animais (dois gatos/grupo) para análise histopatológica A partir do sangue total, realizou-se a separação de leucócitos, extração de RNA, síntese de cDNA e expressão gênica relativa pela qPCR com GAPDH como controle endógeno A análise histopatológica dos seis animais submetidos à endoscopia duodenal revelou enterite linfohistioplasmocitária moderada e difusa em todos os animais, alguns diferenciais de lesões foram encontrados entre os grupos Quanto aos sinais clínicos foi observada diarreia leve, de forma intermitente A expressão gênica relativa de TNF-a (p <1) e IL-1 (p=128) demonstrou diferença estatística significativa em um mesmo grupo durante diferentes períodos de infecção, no entanto não foram observadas diferenças em relação às citocinas IL-6 (p=3746) e IFN-g (7711) No 35º dia pós desafio, os animais imunizados (G1) apresentaram a maior expressão relativa de todas as citocinas IL-6 (285), TNF-a (64), IFN-g (164) e IL-1 (142) Todos os gatos eliminaram oocistos nas fezes Cinco gatos negativos no Sheather no (3º dpi) foram positivos na qPCR, com as seguintes quantificações (328; 45; 47; 59 e 1828 OOPG) A detecção de oocistos só foi possível no 4º dpi por Sheather Não houve diferença estatística entre a quantificação de oocistos por qPCR ou Sheather (p= 1116) Também não houve diferença significativa quanto á quantidade média de oocistos eliminados por grupo em qualquer uma das técnicas, qPCR (p=967) Sheather (p=6534) Houve estimulação das respostas celulares Th1 e Th2 após a fase aguda nos gatos imunizados com proteínas recombinantes associadas ao Quil-A Os animais do G2 (Quil-A) eliminaram menor quantidade média de oocistos, porém a diferença numérica não foi estatisticamente significativa quanto aos outros grupos qPCR pode ser usada como uma alternativa para o Sheather para detecção e quantificação de oocistos de T gondiipt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Toxoplasma gondii is an obligate intracellular protozoan that causes toxoplasmosis, an important zoonosis The felids, among them the domestic cat, are definitive hosts of T gondii, in which occurs the formation of oocysts shed in the feces Since few studies are focused on cats, this study aimed to evaluate the expression of cytokines (IL-6, IL-1, TNF-a, IFN-g) and quantify oocysts by the qPCR technique in cats immunized with recombinant proteins (rROP2 and rHSP7) from T gondii Twelve cats were used in three groups; four animals each G1: was immunized with 25 µg rROP2 (T gondii), 25 µg rHSP7 (E tenella) plus 2 µg Quil-A; G2: received 25 µg of E coli (vector) plus 2 µg of Quil-A; G3: received saline solution only; group control All immunizing doses were administered on days , 21 and 42 of the experiment via nasal route The challenge was done on day , with 6 cysts of the strain TgDoveBr8 (type II) Samples of blood were collected from each animal on days , 7, 14, 21, 35 of the experiment and feces from all animals were examined for 9 days after challenge by Sheather (centrifugeflotation with microscopic examination) and by qPCR On day 79 duodenal biopsies were collected from 6 animals (two cats/group) for histopathological analysis From the whole blood, leukocyte separation, RNA extraction, cDNA synthesis and relative gene expression were performed by qPCR with GAPDH as the endogenous control The histopathological analysis of the six animals submitted to duodenal endoscopy revealed moderate and diffused lymphohistioplasmocitary enteritis in all animals; some lesion differentials were found between groups As for clinical signs, mild diarrhea was observed intermittently The relative gene expression of TNF-a (p <1) and IL-1 (p = 128) demonstrated a statistically significant difference in the same group during different periods of infection, however no differences were observed in relation to IL-6 cytokines (p = 3746) and IFN-g (7711) On the 35th day after inoculation, the immunized animals (G1) had the highest relative expression of all cytokines IL-6 (285), TNF-a (64), IFN-g (164) and IL-1 (142) All cats shed oocysts in the feces Five cats negative in Sheather (3rd dpi) were positive in qPCR, with the following quantifications (328; 45; 47; 59 and 1828 OOPG) The detection of oocysts was only possible in the 4th dpi by Sheather There was no statistical difference between the quantification of oocysts by qPCR or Sheather (p = 1116) There was also no significant difference in the mean number of oocysts removed per group in any of the techniques, qPCR (p = 967) Sheather (p = 6534) There was stimulation of Th1 and Th2 cell responses after the acute phase in cats immunized with recombinant Quil-A-associated proteins The G2 (Quil- A) animals shed the lowest mean number of oocysts, but the numerical difference was not statistically significant for the other groups qPCR can be used as an alternative to Sheather for detection and quantification of T gondii oocystspt_BR
dc.description.notesTese (Doutorado em Ciência Animal) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animalpt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/11330
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeDoutoradopt_BR
dc.relation.coursenameCiência Animalpt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Agráriaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-graduação em Ciência Animalpt_BR
dc.subjectImunologia veterináriapt_BR
dc.subjectToxoplasma gondiipt_BR
dc.subjectVacina veterináriapt_BR
dc.subjectGenéticapt_BR
dc.subjectExpressãopt_BR
dc.subjectVeterinary immunologypt_BR
dc.subjectVeterinary vaccinespt_BR
dc.subjectExpressionpt_BR
dc.subjectGenespt_BR
dc.titleExpressão de citocinas e quantificação de oocistos por qPCR em gatos imunizados com proteína recombinante do Toxoplasma gondiipt_BR
dc.typeTesept_BR

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