Efeito da adição de antioxidantes no cultivo in vitro de folículos pré-antrais equinos inclusos em fragmentos ovarianos

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dc.contributor.advisorSeneda, Marcelo Marcondes [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorGomes, Roberta Garbelinipt_BR
dc.contributor.bancaLandim, Fernanda da Cruzpt_BR
dc.contributor.bancaLisboa, Lívia Airespt_BR
dc.contributor.bancaSilva, Luciano Andradept_BR
dc.contributor.bancaBarreiros, Thales Ricardo Rigopt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T14:46:49Z
dc.date.available2024-05-01T14:46:49Z
dc.date.created2015.00pt_BR
dc.date.defesa12.02.2015pt_BR
dc.description.abstractResumo: O objetivo do presente trabalho foi avaliar os efeitos da adição dos antioxidantes ácido ascórbico ou ácido alfa lipoico no cultivo in vitro de foliculos pré-antrais equinos inclusos em fragmentos ovarianos, por 2 ou 6 dias Em cada um dos experimentos, foram coletados 5 ovários (n = 5) oriundos de 5 éguas em anestro estacional de abatedouro local Os fragmentos ovarianos (experimento 1: ácido ascórbico) e os ovários (experimento 2: ácido alfa lipoico) foram transportados em PBS suplementado com estreptomicina (2 mg/mL) e penicilina (2 UI/mL) a 4º C por uma hora Os fragmentos (n = 9) obtidos da porção mais interna do tecido ovariano de cada animal pesavam 125 a 135 mg, medindo 5 x 5 x 1 mm Um dos fragmentos foi imediatamente fixado em Bouin (Controle; MEM-D) e os outros fragmentos foram cultivados por 2 (D2) ou 6 dias (D6) em MEM suplementado (MEM+) ou MEM+ acrescido de 3 diferentes concentrações de ácido ascórbico (25, 5 ou 1 µg/mL) ou ácido alfa lipoico (5, 1 ou 25 µM) Ao término do cultivo in vitro, todos os fragmentos obtidos foram submetidos à avaliação histológica através de coloração de PAS Os fragmentos obtidos no experimento 2 também foram submetidos à avaliação da atividade proliferativa das células da granulosa através de imunohistoquímica utilizando o marcador antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA) Todos os folículos pré-antrais encontrados foram classificados de acordo com seu estágio de desenvolvimento em primordial ou em desenvolvimento (primário e secundário) e também quanto à sua morfologia, em normal ou degenerado Para a imunohistoquímica, os folículos também foram classificados em PCNA-positivo (pelo menos uma célula da granulosa corada) e PCNA-negativo (nenhuma coloração) Os dados obtidos no experimento 1, foram analisados através do teste de Kruskal-Wallis e no experimento 2, através do teste Exato de Fisher, ambos com nível de significância de 5% (p < ,5) No experimento 1, foram analisados 47 folículos e 43,5% apresentaram-se morfologicamente normais Os tratamentos MEM+, 25, 5 e 1 µg/mL no dia 2 de cultivo in vitro apresentaram resultados similares quanto à porcentagem de folículos em desenvolvimento Os tratamentos MEM+ adicionado de 5 ou 1 µg/mL de ácido ascórbico apresentaram maiores porcentagens de folículos em desenvolvimento que primordiais comparado aos demais grupos testados no dia 6 de cultivo in vitro (p < ,5) No experimento 2, foram analisados 195 folículos (767 folículos através de histologia e 328 através de imunohistoquímica) Dos 767 folículos analisados através de histologia, 56,3% apresentaram-se morfologicamente normais O grupo MEM+ apresentou maior porcentagem de folículos em desenvolvimento (88,2%) que primordiais, diferindo dos demais grupos no dia 2 de cultivo in vitro (p < ,5) O grupo MEM+ acrescido de 5 µM de ácido alfa lipoico, mostrou melhores resultados comparado aos demais tratamentos no dia 6 do cultivo in vitro (p < ,5), com 1% dos folículos em desenvolvimento e PCNA-positivo Pode-se concluir que o cultivo por 6 dias de folículos pré-antrais equinos inclusos em fragmentos ovarianos oriundos de abatedouro em MEM+ acrescido de 5 ou 1 µg/mL de ácido ascórbico ou MEM+ acrescido de 5 µM de ácido alfa lipoico, permitiu o desenvolvimento folicularpt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: The aim of this study was to evaluate the effects of the addition of the antioxidants ascorbic acid or alpha lipoic acid on in vitro culture of equine preantral follicles enclosed in ovarian fragments, for 2 or 6 days In each experiment, 5 ovaries (n = 5) of 5 mares in seasonal anestrus were collected from a local slaughterhouse The ovarian fragments (experiment 1: ascorbic acid) and ovaries (experiment 2: alpha lipoic acid) were transported in PBS supplemented with streptomycin (2 mg/mL) and penicillin (2 IU/mL) at 4 °C during one hour The inner portion of ovarian tissue fragments’ (n= 9) measurements indicate weights between the range of 125 to 135 mg in dimensions of 5 x 5 x 1 mm One fragment was immediately fixed in Bouin (control; MEM-D) and the other fragments were cultured for 2 (D2) or 6 days (D6) in MEM supplemented (MEM+) or MEM+ with the addiction of 3 different ascorbic acid concentrations (25, 5, or 1 µg/mL) or alpha lipoic acid (5, 1, or 25 µM) At the end of the in vitro culture, all fragments were subjected to histological evaluation by PAS staining The fragments obtained in experiment 2 were also evaluated for proliferative activity of granulosa cells by immunohistochemistry with the use of proliferation cell nuclear antigen (PCNA) All preantral follicles were categorized according the stage of development in primordial or development (primary and secondary), and also according the morphology, in normal or degenerated By immunohistochemistry, the follicles were classified in PCNA-positive (at least one granulosa cell and/or oocyte staining) and PCNA-negative (no staining) The analysis of the data obtained in experiment 1 was made using the Kruskal-Wallis test, while experiment 2 was made using Fisher's exact test, both of them with a significance level of 5% (P < 5) In experiment 1, 47 follicles were analyzed and 435% were categorized as morphologically normal The treatments MEM+, 25, 5 and 1 µg/mL on day 2 resulted in similar percentages of developing follicles The MEM+ treatment containing 5 or 1 µg/mL ascorbic acid presented higher percentages of developing follicles than primordial in comparison to the other in vitro culture groups tested on day 6 (P < 5) In experiment 2, 195 follicles were analyzed (767 follicles by histology and 328 by immunohistochemistry) In 767 follicles analyzed by histology, 563% were morphologically normal The MEM+ group had a higher percentage of developing follicles (882%) than primordial, differing from the other in vitro culture groups on day 2 (P < 5) The MEM+ group plus 5 µM of alpha lipoic acid presented better results when compared to the other in vitro culture treatments on day 6 (P < 5), with 1% of the development follicles and PCNA-positive In conclusion, follicular development was observed after in vitro culture of equine preantral follicles enclosed in ovarian fragments collected in abattoir during 6 days in MEM+ plus 5 or 1 µg/mL ascorbic acid or MEM+ plus 5 µM of alpha lipoic acidpt_BR
dc.description.notesTese (Doutorado em Ciência Animal) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animalpt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/15281
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeDoutoradopt_BR
dc.relation.coursenameCiência Animalpt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Agráriaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-graduação em Ciência Animalpt_BR
dc.subjectFolículos ovarianospt_BR
dc.subjectAntioxidantespt_BR
dc.subjectOváriospt_BR
dc.subjectÉguapt_BR
dc.subjectOvarian folliclespt_BR
dc.subjectOvariespt_BR
dc.subjectMarespt_BR
dc.titleEfeito da adição de antioxidantes no cultivo in vitro de folículos pré-antrais equinos inclusos em fragmentos ovarianospt_BR
dc.typeTesept_BR

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