Carnes PSE (pale, soft, exudative) de frangos : análise dos transcritos do gene codificador da proteína ?RyR

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dataload.collectionmapped02 - Mestrado - Ciência de Alimentospt_BR
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dc.contributor.advisorShimokomaki, Massami [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorZiober, Iris Lambertipt_BR
dc.contributor.bancaCoutinho, Luiz Lehmannpt_BR
dc.contributor.bancaOba, Alexandrept_BR
dc.contributor.coadvisorNepomuceno, Alexandre Lima [Coorientador]pt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T13:47:14Z
dc.date.available2024-05-01T13:47:14Z
dc.date.created2009.00pt_BR
dc.date.defesa28.08.2009pt_BR
dc.description.abstractResumo: Carnes PSE (pálida, flácida e exsudativa) ocorrem por fatores múltiplos, e o estresse e causas genéticas tem papeis cruciais Em suínos, uma mutação no gene RYR1 (receptor de rianodina tipo 1) leva à PSS (Síndrome do Estresse Suíno) e às carnes PSE A RyR1 é uma proteína formadora do canal de liberação de Ca2+ no retículo sarcoplasmático de células musculares Em suínos com a mutação neste gene o estresse desencadeia um acúmulo intracelular de Ca2+, e consequentemente à uma contração muscular permanente, fazendo com que a célula dispenda mais glicogênio tentando relaxar o músculo, produzindo assim mais ácido lático, provocando uma rápida queda do pH enquanto a carcaça ainda está quente, o que leva às carnes PSE Em frangos, a região N-terminal do ?RYR – a região hotspot para mutações que levam à carnes PSE em suínos – ainda não foi sequenciada O objetivo deste trabalho foi selecionar animais pelo teste do halotano, além de submeter aves ao estresse térmico (ET) e exposição ao halotano pré abate para avaliar alterações nos transcritos do ?RYR e correlacioná-los com a ocorrência de carnes PSE Para isso foram realizados quatro experimentos (A, B, C e D) e após o abate, foi coletado um fragmento do músculo Pectoralis major de onde se extraiu RNA total, o qual foi utilizado para obtenção de cDNA; amplificou-se a região a ser estudada, e estes fragmentos foram clonados e sequenciados Para classificação de carnes PSE utilizou-se o valor de L* em 24h Em 75 amostras analisadas, foram identificadas 62 variações ao longo das sequências obtidas A sequência mais conservada apresentou 97% de similaridade com ?RYR de perus No experimento A, das 1 amostras que apresentaram proteínas alteradas, sete originaram carnes PSE, e apenas quatro eram de amostras HAL+ Mas amostras HAL- que também tinham alterações nos transcritos também originaram carnes PSE No experimento B 88,2% das amostras, desenvolveram carnes normais (provavelmente devido ao tempo de jejum pré-abate superior a 24h) e nenhuma das alterações dos transcritos encontradas ocorreram em amostras que produziram carnes PSE O halotano não foi um bom identificador de amostras com alterações No Experimento C, quando as aves foram submetidas ao halotano no pré abate e também ao ET, proteínas truncadas (TR) foram prevalentes nas aves expostas ao halotano, mas apenas as que também foram expostas ao ET, originaram carnes PSE No Experimento D, não houve jejum pré abate nem chiller e 94,5% das amostras foram PSE, enquanto que o teste do halotano, em conjunto com o ET detectou amostras que teriam proteínas TR Conclui-se então que o teste do halotano não foi eficaz para triar amostras que teriam alterações no mRNA nesta região do RYR O ET em conjunto com a exposição ao halotano parecem denunciar o aparecimento de códons sem sentido do ?RYR (proteínas TR) e de carnes PSE Não houve uma mutação em comum entre os grupos testados que pudesse ser correlacionada com carnes PSE e a resposta ao halotano O ET pode ter modulado a expressão gênica, o que explicaria o grande número de transcritos alterados encontrados, principalmente quando esta variável foi aplicada Esses resultados indicam diferenças nos mecanismos de formação de carnes PSE e resposta ao halotano entre aves e mamíferospt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Broiler PSE meat is the consequence of multiple factors being the physiological stress the cause most evaluated and recently genetic origin has gained its scientific attention In pigs, a mutation in the RYR1 gene, receptor for rianodine type 1, leads to the PSS (Pork Stress Syndrome,) and subsequently to PSE (Pale, Soft, Exudative) meat RyR1 is a protein forming the Ca2+ release channel within muscle cells sarcoplasmic reticulum In pigs with this mutation, the physiological stress triggers an accumulation of intracellular calcium, and consequently to a continuous muscle contraction, thus accelerating the glycolysis producing more lactic acid subsequently leading to the PSE meat formation The objective of this work was to sequence broiler chicken N-terminal region of ?RYR since it is the region most prone to mutations that conducted to the PSS and subsequently to PSE meat In order to select the genetically sensitive animals, four experiments were conducted in birds that had prior selection by the halothane test (HAL+ and HAL-) and treatments of thermal stress (TS) and halothane exposure before slaughtering A fragment of Pectoralis major m was collected from samples previously classified as PSE and non PSE meat by measuring their characteristic colors The extraction of total RNA was performed, which was used to obtain cDNA and the specific region was amplified and thus these fragments were cloned and sequenced Among 75 samples analyzed, 62 samples were found to have variations within the sequence of 468 obtained base pairs, which presented 97% of similarity with turkey ?RyR The following results were obtained from these four experiments: In Experiment A, from the 1 samples that showed alterations in the protein, seven originated PSE meat and just four of them were HAL+ However samples HAL- that had alterations within the transcripts also originated PSE meat In Experiment B, the halothane test was not a good genetic identifier of samples with transcript alterations Non-PSE meat was produced by 88,2% of the animals, presumably because of a long fasting pre slaughtering treatment that the birds were submitted and none of the the found altered transcripts were correlated to PSE meat development In Experiment C, the truncated proteins were prevalent in birds exposed to halothane test, but only those that were associated to TS were capable to originated PSE meat Finally, in Experiment D, in birds submitted to non pre slaughter fasting and the meat did not go through the chiller, 945% of breast samples presented PSE meat and furthermore truncated proteins were detected in chicken HAL+ associated to TS treatment Lastly, our results pointed out that the halothane test was not fully efficient to detect samples that presented alterations at that strategic regions of ?RYR gene However only the association of the thermal stress, and halothane exposure presented evidence for this role suggesting a modulation of gene expression by the environmental factors Unfortunately, a common gene mutation was not found and the large number of altered transcripts found was possibly the result of environmental factors particularly heat stress which could somehow modulate the ?RYR gene expression Also our results indicated that the avian physiological role related to halothane susceptibility and PSE is different in relation to the mammalspt_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Ciência de Alimentos) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciência de Alimentospt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/12011
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenameCiência de Alimentospt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Agráriaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-graduação em Ciência de Alimentospt_BR
dc.subjectFrango de cortept_BR
dc.subjectEfeito do estressept_BR
dc.subjectAvept_BR
dc.subjectGenética molecularpt_BR
dc.subjectCarne de avept_BR
dc.subjectBroilerspt_BR
dc.subjectPoultry as foodpt_BR
dc.subjectQualitypt_BR
dc.subjectEffect of stresspt_BR
dc.titleCarnes PSE (pale, soft, exudative) de frangos : análise dos transcritos do gene codificador da proteína ?RyRpt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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