Atividade hemolítica e hemaglutinante de células viáveis e antígenos solúveis de Paracoccidioides spp. sobre eritrócitos humanos

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dataload.collectionmapped02 - Mestrado - Patologia Experimentalpt_BR
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dc.contributor.advisorItano, Eiko Nakagawa [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorSantos, Fernando Cezar dospt_BR
dc.contributor.bancaMendes, Rinaldo Pônciopt_BR
dc.contributor.bancaWatanabe, Maria Angélica Eharapt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T14:47:51Z
dc.date.available2024-05-01T14:47:51Z
dc.date.created2015.00pt_BR
dc.date.defesa13.04.2015pt_BR
dc.description.abstractResumo: Paracoccidioidomicose (PCM), uma micose sistêmica endêmica na América Latina, é causada pelos fungos termodimórficos P brasiliensis e P lutzii A atividade hemolítica tem sido considerada um importante fator de virulência em diversos patógenos e tem sido detectada com células leveduriformes de P brasiliensis e P lutzii O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade hemolítica e hemaglutinante de células leveduriformes de P brasiliensis e P lutzii e seus antígenos solúveis Inicialmente, células viáveis de P brasiliensis (Pb339) e P lutzii (LDR2) e seus antígenos livres de células (CFA) nativos ou aquecidos, em diferentes concentrações (11, 2, 3, 4, 5, 6,7 células/ml e 15; 75; 37 e 18 mg proteina/ml, respectivamente) foram submetidos ao teste de hemólise Adicionalmente, os componentes solúveis de cultura dos fungos em meios sólidos, CFA (Saboraud com ou sem BHI) e sobrenadantes de cultura dos fungos (ExoAgs) em meios líquidos (RPMI, BHI), coletados a cada três dias por um período de 3 dias também foram avaliados O teste de hemólise foi realizado em placas de 96 poços com eritrócitos humanos (1%) à 37ºC (3 hrs e 5 hrs) e o grau de hemólise foi avaliado por espectrofotometria no comprimento de onda de 55 nm A atividade hemolítica foi observada em ambos os fungos na concentração de 17 células/poço e foi maior com LDR2 quando comparado ao Pb339 (p<,5) Em contraposição, CFA de Pb339 apresentou maior atividade hemolítica que CFA de LDR2 (p<,5) Em ambos, a atividade hemolítica do CFA foi maior em 5 hrs do que em 3 hrs de incubação e também quando a maior concentração foi usada Surpreendentemente, foi também detectada atividade hemaglutinante com ambos os fungos em concentrações menores (16,15,14) Essa hemaglutinação foi detectada em CFA diluído e aquecido de Pb339 ou CFA de LDR2 aquecido, mas não diluído O perfil hemolítico foi similar com antígenos solúveis de Pb339 obtidos de meios sólidos e líquidos, com atividade máxima começando em 9-12 dias de cultura, que foi mantida até a avaliação final No entanto, somente antígenos solúveis de LDR2 crescidos em meio Saboraud apresentaram alta atividade hemolítica nos dias 15-18, que então decresceu Todas as outras fontes de LDR2 apresentaram atividade diminuída durante todos os períodos de cultura avaliados Em conclusão, células leveduriformes de P brasiliensis e P lutzii possuem a habilidade de lisar e aglutinar eritrócitos humanos, mas possivelmente Pb339 é mais eficaz em liberar esse fator em forma solúvel e tanto tempo quanto condições de cultura afetam a produção de fatores hemolíticospt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Paracoccidioidomycosis (PCM), an endemic systemic mycosis in Latin America, is caused by thermodimorfic fungi P brasiliensis and P lutzii The hemolytic activity has been considered an important virulence factor in many pathogens and the hemolytic activity has been detected in yeast cells of P brasiliensis and P lutzii This study was designed to evaluate the hemolytic and hemagglutinating activity of P brasiliensis and P lutzii yeast cells and theirs soluble antigens Initially, P brasiliensis (Pb339) and P lutzii (LDR2) viable yeast cells and its native or heated cell free antigens (CFA), in different concentrations (11, 2, 3, 4, 5, 6,7 cells/ml and 15; 75; 37 and 18 mg protein/ml, respectively), were submitted to hemolysis test Additionally, the soluble components from fungi grown on solid medium, CFA (Saboraud with or without BHI) and supernatants from fungi (ExoAgs) grown in liquid media (RPMI, BHI), collected every three days for a period of 3 days were also evaluated The hemolysis test was performed in 96-well plates with human erythrocytes (1%), at 37ºC (3 hrs and 5 hrs) and the degree of hemolysis evaluated by spectrophotometry at a wavelength of 55 nm The hemolytic activity was observed in both fungi at 17 cells and was stronger with LDR2 than Pb339 (p<5) However, the CFA from Pb339 presented stronger hemolysis than LDR2 (p<5) In both, CFAs activity was stronger in 5 than 3 hrs incubation as well as in higher concentration Surprisingly, it was detected hemagglutinating activity with both yeast cells in lower concentrations (16,15,14) This hemagglutination was also detected in heated and diluted CFA from Pb339 or in heated and not diluted CFA from LDR2 The hemolytic activity profile was similar with soluble antigens from Pb339 grown on both solid or liquid media, with maximum activity starting in 9-12 days of culture remaining until the final evaluation Nonetheless, only soluble antigens from LDR2 grown in Sabouraud medium presented stronger activity at 15-18 days followed by decrease All other LDR2 sources presented low activity throughout the evaluated period of culture In conclusion, P brasiliensis and P lutzii yeast cells present the ability to lyse and agglutinate human erythrocytes, but possibly Pb339 is more effective in releasing this factor in soluble form and both time and growth culture conditions affect the production of hemolytic factorspt_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Patologia Experimental) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Patologia Experimentalpt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/15361
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenamePatologia Experimentalpt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Biológicaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Patologia Experimentalpt_BR
dc.subjectParacoccidioidomicosept_BR
dc.subjectFungospt_BR
dc.subjectCultura e meios de culturapt_BR
dc.subjectHemólise e hemolisinaspt_BR
dc.subjectVirulência (Microbiologia)pt_BR
dc.subjectParacoccidioidomycosispt_BR
dc.subjectFungipt_BR
dc.subjectVirulence (Microbiology)pt_BR
dc.subjectCulture and culture mediapt_BR
dc.titleAtividade hemolítica e hemaglutinante de células viáveis e antígenos solúveis de Paracoccidioides spp. sobre eritrócitos humanospt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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