Otimização do método de geração de plantas compostas de soja e validação de normalizadores para estudos de expressão genica por RT-QPCR em resposta a infecção por Meloidogynes javanica

Página do item simplificado
dataload.collectionmapped02 - Mestrado - Biotecnologiapt_BR
dataload.filenamenourau3757.pdfpt_BR
dataload.handlemapped123456789/49pt_BR
dataload.idpergamum17292pt_BR
dataload.idvirtuanourauvtls000198914pt_BR
dataload.idvirtuapergamumvtls000198914pt_BR
dataload.idvirtuapergamum.sameurlnourauSIMpt_BR
dataload.linknourauhttp://www.bibliotecadigital.uel.br/document/?code=vtls000198914pt_BR
dataload.linknourau.regularSIMpt_BR
dataload.linknourau.retificadohttp://www.bibliotecadigital.uel.br/document/?code=vtls000198914pt_BR
dataload.linknourau.size64.00pt_BR
dc.contributor.advisorMarcelino-Guimarães, Francismar Corrêa [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorKuma, Kátia Mikipt_BR
dc.contributor.bancaMoreira, Renata Stolfpt_BR
dc.contributor.bancaCarvalho, Mayra da Cruz Costa Gallo dept_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T14:45:28Z
dc.date.available2024-05-01T14:45:28Z
dc.date.created2014.00pt_BR
dc.date.defesa11.12.2014pt_BR
dc.description.abstractResumo: Os métodos aplicados à analise funcional de genes são de fundamental importância na validação de resultados obtidos de estudos in silico e/ou de prospecção gênica Os métodos de transformação genética para a obtenção de tecidos com expressão transiente e de rápidos resultados são os de maior interesse Dessa forma, a transformação via A rhizogenes torna-se um método rápido para a obtenção de plantas contendo raízes transformadas, além de se mostrar eficiente em estudos de superexpressão e/ou silenciamento de genes relacionados a estresses causados por fitopatógenos de raízes Alguns protocolos têm sido adaptados em soja, mas há limitações na eficiência de transformação, levando a um reduzido número de plantas em bom estado para a condução de bioensaios Neste trabalho, o método de transformação de raízes de soja com A rhizogenes foi otimizado permitindo uma elevação significativa na eficiência na transformação e recuperação de plantas transformadas, visando sua aplicação em estudos envolvendo a interação da soja com nematoides Após a adição de uma etapa de recuperação via hidroponia e alteração no processo de seleção com a retirada do antibiótico higromicina, foi obtida uma taxa de 55% de eficiência de transformação As análises de RNAm conduzidas via RT-qPCR são amplamente utilizadas para a validação do perfil de expressão gênica, uma vez que constitui uma metodologia muito sensível, especifica, rápida e com boa reprodutibilidade Tais análises necessitam do emprego de genes normalizadores, cujo níveis de expressão permaneçam invariáveis entre os diferentes órgãos, estágios de desenvolvimento e tratamento em estudo Desse modo, tais normalizadores são indispensáveis à precisão da quantificação da expressão gênica, eliminando variações devido à quantidade inicial de cDNA adicionado nas reações, garantindo que apenas as variações na expressão dos genes sejam consideradas Neste trabalho sete genes comumente utilizados como normalizadores em ensaios de RT-qPCR (GmELF1-a, GmELF1-ß, GmTUA, GmTUB, Gmß-actina, GmGAPDH e o GmRNAr18S) foram avaliados quando à estabilidade de expressão em raízes transformadas via A rhizogenes, submetidas à infecção com M javanica, nos períodos de inoculação de 8 e 5 dpi (dias após inoculação), a fim de identificar os melhores normalizadores sob tais condições Os genes GmELF1-ß e GmELF1-a foram os mais estáveis em todas as análises comparativas enquanto o gene GmGAPDH foi o que apresentou menor estabilidadept_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Applied methods to functional analysis of genes are critical for validation of results obtained from in silico studies and/or by gene prospecting Methods of genetic transformation to obtain transient expression tissues and rapid results are the major interest Thus, the transformation through A rhizogenes becomes an extremely fast method for obtaining transgenic roots; in addition it is efficient to overexpression genes related to stresses caused by root’s phytopathogens Some protocols have been adapted, but there are limitations on the transformation efficiency, causing a reduction on the amount of plants in good condition obtained for conducting bioassays with nematodes In this work the method of transformation of soybean roots with A rhizogenes was optimized allowing a significant increase in efficiency in the processing and recovery of transformed plants, for their application in studies involving the interaction of soybean and nematodes After addition of a recovery step by hydroponic and changing the selection process with the exclusion of hygromycin antibiotic a rate of 55% transformation efficiency was obtained The mRNA analyzes conducted by RT-qPCR are widely used for the validation profile of gene expression, since it is a very sensitive, specific, fast and with good reproducibility method These analyzes require the use of housekeeping genes whose expression levels remain unchanged between the different organs, developmental stages and study treatment Thus, normalizing is essential to the accuracy of quantification expression gene, eliminating variation due to the initial amount of cDNA added to the reaction, ensuring that only changes in gene expression are considered In this work seven genes commonly used as a housekeeping gene in RT-qPCR assays (GmELF1-a, ß-GmELF1, GmTUA, GmTUB, Gmß-actin, and GmGAPDH GmRNAr18S) were evaluated the stability of expression in transformed and untransformed roots via A rhizogenes, subject to infection with Meloidogyne javanica, during periods of inoculation 8 and 5 dpi (days after inoculation) in order to identify the best normalizing genes under such conditions The GmELF1-ß and GmELF1 -a genes were the most stable in all benchmarks, while the GmGAPDH gene showed the lowest stabilitypt_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Exatas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologiapt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/15155
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenameBiotecnologiapt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Exataspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-graduação em Biotecnologiapt_BR
dc.subjectBiotecnologia agrícolapt_BR
dc.subjectGenespt_BR
dc.subjectSojapt_BR
dc.subjectCultivopt_BR
dc.subjectGenética vegetalpt_BR
dc.subjectAgricultural biotechnologypt_BR
dc.subjectBreedingpt_BR
dc.subjectPlant geneticspt_BR
dc.subjectBiotechnologypt_BR
dc.subjectFood - Soybeanpt_BR
dc.titleOtimização do método de geração de plantas compostas de soja e validação de normalizadores para estudos de expressão genica por RT-QPCR em resposta a infecção por Meloidogynes javanicapt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

Arquivos

Pacote Original
Agora exibindo 1 - 1 de 1
Imagem de Miniatura
Nome:
3757.pdf
Tamanho:
2.19 MB
Formato:
Adobe Portable Document Format
Baixar

Coleções

02 - Mestrado - Biotecnologia