Impacto da fase de indução da quimioterapia no perfil de mediadores inflamatórios sistêmicos e do microambiente tumoral na leucemia linfocítica aguda da infância

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dataload.collectionmapped01 - Doutorado - Fisiopatologia Clínica e Laboratorialpt_BR
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dc.contributor.advisorPanis, Carolina [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorOliveira, Geise Ellen Brotopt_BR
dc.contributor.bancaVenturini, Danielept_BR
dc.contributor.bancaAmarante, Marla Karinept_BR
dc.contributor.bancaVictorino, Vanessa Jacobpt_BR
dc.contributor.bancaTomiotto-Pellissier, Fernandapt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T11:39:42Z
dc.date.available2024-05-01T11:39:42Z
dc.date.created2021.00pt_BR
dc.date.defesa03.12.2021pt_BR
dc.description.abstractResumo: A leucemia linfocítica aguda (LLA) é a principal neoplasia da infância cujo tratamento se baseia na poliquimioterapia dividida em fases (indução, consolidação e manutenção) A indução consiste em uma etapa determinante para o bom prognóstico dos pacientes portadores de LLA e no uso intensivo de drogas antineoplásicas combinadas no período de 28 dias, escalonados do dia (D - ao diagnóstico), ao dia 28 (D28 - final da fase de indução) Apesar do bom prognóstico da doença, com taxas de cura superiores a 8%, pouco se sabe sobre o impacto do tratamento no perfil de mediadores moleculares da inflamação, um hallmark do câncer descrito como determinante do comportamento biológico dos tumores A importância das proteínas e metabólitos produzidos na resposta inflamatória, como citocinas e mediadores do estresse oxidativo, tem sido discutida tanto no funcionamento normal da medula óssea, como na resposta à invasão medular pelos clones malignos Apesar disso, pouco se sabe sobre o impacto do tratamento quimioterápico sobre a dinâmica destes mediadores e de que forma isso pode influenciar tanto a resposta ao tratamento, como a imunopatogênese da LLA Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o impacto da quimioterapia na fase de indução do tratamento da LLA sobre o perfil de mediadores inflamatórios produzidos sistemicamente e no microambiente tumoral em amostras de sangue de pacientes pediátricos diagnosticados com LLA do tipo B (LLA-B), comparando-se os perfis em D e D28 Para alcançar este objetivo, este estudo foi dividido em 2 etapas A primeira parte teve como objetivo traçar o perfil proteômico sistêmico e tumoral de amostras de sangue periférico (SP) e de medula óssea (MO) coletadas em D e D28, e validar possíveis proteínas de interesse ou vias de sinalização pouco conhecidas na LLA-B Na segunda etapa, avaliou-se o perfil de estresse oxidativo e de citocinas em amostras de SP e MO de pacientes com LLA-B também em D e D28 O estudo encontra-se cadastrado na Plataforma Brasil sob o número CAAE 244982135231 e foi aprovado pelo comitê de Ética Institucional Para ambas as etapas, foram recrutados 17 pacientes pediátricos atendidos no Instituto de Câncer de Londrina, entre setembro de 214 a dezembro de 216, com diagnóstico confirmado clínica e laboratorialmente para LLA-B, submetidos ao mesmo protocolo de tratamento Após assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido pelos responsáveis, e assentimento dos pacientes, foram coletadas amostras anticoaguladas de SP (5mL) e aspirado de MO (2 a 3 mL) em D e D28 As amostras foram centrifugadas para obtenção de plasma, onde foram realizadas as seguintes análises: investigação do perfil diferencial de proteínas por espectrometria de massa label-free, dosagem dos níveis de fator de necrose tumoral alfa (TNF-a) e interferon gama (IFN-?) por enzimaimunoensaio (ELISA), dosagem de transtiretina por ensaio imunoturbidimétrico, determinação dos níveis dos metabólitos do óxido nítrico pela técnica de Cádmio-Cobre-Griess (NOx), determinação do conteúdo de grupos sulfidrila de proteínas (SH) baseado na reação do ácido 5,5-ditiobis-2 nitrobenzóico, determinação da capacidade antioxidante total plasmática (TRAP) e mensuração dos níveis de hidroperóxidos lipídicos por quimioluminescência Dados clínicos foram obtidos de consultas aos prontuários médicos e incluíram idade e peso ao diagnóstico, perfil do hemograma, acometimento de sistema nervoso central e testicular, dados de mielograma e avaliações sobre a presença de doença residual mínima (DRM) ao final do tratamento de indução Os dados obtidos foram analisados no software GraphPad Prism 7 (USA) e foi adotado o valor de p<,5 como significante Em relação ao estudo proteômico, em D o SP x MO, foi caracterizado como um ambiente pró-inflamatório, com a expressão das proteínas de coagulação cininogênio (KNG), plasmina e plasminogênio downreguladas D28 foi caracterizado pelos processos relacionados à resposta imunológica e a super expressão do IRF3 (activation of Interferon Regulatory Factor 3) e da proteína transtiretina O fator de transcrição da proteína leucemia mielóide aguda 1 (RUNX1) foi apontado como fator de transcrição comum tanto em D como em D28 As proteínas transtiretina e IFN-? foram validadas nas amostras e se mostraram aumentadas e diminuídas, respectivamente, em D28 Sobre o perfil de citocinas e de estresse oxidativo, observou-se que no D28 os níveis de TNF-a estavam aumentados no SP, enquanto que o IFN-? aumentou de modo significante apenas na MO Os hidroperóxidos aumentaram em D28 no SP de pacientes com DRM positiva Os resultados obtidos em ambos estudos permitem concluir que a transtiretina e IFN-? desempenham um papel importante nos mecanismos de resolução da LLA-B, e que os níveis de hidroperóxidos podem variar ao longo do tratamento de LLA na presença da DRMpt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Acute lymphocytic leukemia (ALL) is the main cancer in childhood, whose treatment is based on polychemotherapy divided into phases (induction, consolidation and maintenance) Induction is a decisive step for the good prognosis of patients with ALL, and consists of the intensive use of antineoplastic drugs combined in a period of 28 days, staggered from day (D - to diagnosis) to 28 (D28 - end of induction phase), and divided into weeks of polychemotherapeutic treatment Despite the good prognosis of the disease, with cure rates above 8%, little is known about the impact of treatment on the profile of molecular mediators of inflammation, a hallmark of cancer described as a determinant of the biological behavior of tumors The importance of proteins and metabolites produced in the inflammatory response, such as cytokines and oxidative stress mediators, has been discussed both in the normal functioning of the bone marrow and in the response to bone marrow invasion by malignant clones Despite this, little is known about the impact of chemotherapy treatment on the dynamics of these mediators, and how this can influence both the response to treatment and the immunopathogenesis of ALL In this context, the present study aimed to evaluate the impact of chemotherapy in the induction phase of ALL treatment on the profile of systemically produced inflammatory mediators and in the tumor microenvironment in blood samples from pediatric patients diagnosed with type B ALL (ALL- B), comparing the profiles in D and D28 To achieve this goal, this study was divided into 2 stages The first part aimed to trace the systemic and tumor proteomic profile of peripheral blood (PB) and bone marrow (BM) samples collected at D and D28, and to validate possible proteins of interest or poorly known signaling pathways in ALL-B In the second stage, the profile of oxidative stress and cytokines was evaluated in PB and BM samples from patients with ALL-B also in D and D28 The study is registered at Plataforma Brasil under the number CAAE 244982135231, and was approved by the Institutional Ethics Committee For both stages, 17 pediatric patients treated at the Cancer Institute of Londrina between September 214 and December 216 with clinically and laboratory confirmed diagnosis for ALL-B, who underwent the same treatment protocol, were recruited After signing the free and informed consent form by the guardians, and consenting to the patients, anticoagulated PB samples (5mL) and BM aspirates (2 to 3 mL) were collected on D and D28 The samples were centrifuged to obtain plasma, where the following analyzes were performed: investigation of the differential protein profile by label-free mass spectrometry, measurement of the levels of tumor necrosis factor alpha (TNF-a) and interferon gamma (IFN- ?) by enzyme immunoassay (ELISA), measurement of transthyretin by immunoturbidimetric assay, determination of levels of nitric oxide metabolites by the Cadmium-Copper-Griess (NOx) technique, determination of the content of sulfhydryl groups of proteins (SH) based on the reaction of 5,5-dithiobis-2 nitrobenzoic acid, determination of plasma total antioxidant capacity (TRAP) and measurement of lipid hydroperoxide levels by chemiluminescence Clinical data were obtained from medical records consultations, and included age and weight at diagnosis, blood count profile, involvement of the central nervous system and testicular, myelogram data and assessments of the presence of minimal residual disease (MRD) at the end of treatment Induction The data obtained were analyzed using the GraphPad Prism 7 software (USA) and the value of p<5 was adopted as significant Regarding the proteomic study, on D the PB, in comparison to BM, was characterized as a pro-inflammatory environment, with the expression of downregulated kininogen (KNG), plasmin and plasminogen coagulation proteins D28 was characterized by processes related to the immune response and the overexpression of the transcription factor in response to interferon 3 (IRF3) and the transthyretin protein Acute myeloid leukemia protein transcription factor 1 (RUNX1) was appointed as a common transcription factor in both D and D28 The transthyretin and IFN-? proteins were validated in the samples and showed to be increased and decreased, respectively, in D28 Regarding the profile of cytokines and oxidative stress, it was observed that on D28, TNF-a levels were increased in PB, while IFN-? increased significantly only in BM Hydroperoxides increased at D28 in the BM of patients with positive minimal residual disease (MRD) The results obtained in both studies allow us to conclude that transthyretin and IFN-? play an important role in the mechanisms of resolution of ALL-B, and that the levels of hydroperoxides can vary along the treatment of ALL in the presence of MRDpt_BR
dc.description.notesTese (Doutorado em Fisiopatologia Clínica e Laboratorial) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Fisiopatologia Clínica e Laboratorialpt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/8682
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeDoutoradopt_BR
dc.relation.coursenameFisiopatologia Clínica e Laboratorialpt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências da Saúdept_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Fisiopatologia Clínica e Laboratorialpt_BR
dc.subjectLeucemia linfocítica aguda (LLA)pt_BR
dc.subjectNeoplasiapt_BR
dc.subjectQuimioterapiapt_BR
dc.subjectEstresse oxidativopt_BR
dc.subjectAcute lymphocytic leukemia (ALL)pt_BR
dc.subjectNeoplasmpt_BR
dc.subjectChemotherapypt_BR
dc.subjectOxidative stresspt_BR
dc.titleImpacto da fase de indução da quimioterapia no perfil de mediadores inflamatórios sistêmicos e do microambiente tumoral na leucemia linfocítica aguda da infânciapt_BR
dc.typeTesept_BR

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