Caracterização parcial de fator(es) hemolítico(s) de Arthrographis kalrae

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dc.contributor.advisorItano, Eiko Nakagawa [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorNagashima, Luciene Airypt_BR
dc.contributor.bancaOno, Mário Augustopt_BR
dc.contributor.bancaNogueira, Marco Antoniopt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T13:20:02Z
dc.date.available2024-05-01T13:20:02Z
dc.date.created2009.00pt_BR
dc.date.defesa12.01.2009pt_BR
dc.description.abstractResumo: No presente estudo, componentes solúveis de Arthrographis kalrae foram investigados em relação à imunogenicidade/antigenicidade e atividade hemolítica Para avaliação da imunogenicidade/antigenicidade, o estudo foi realizado utilizando cell-free antigens (CFA) e antígenos sonicados e anticorpos anti-CFA de coelho por imunodifusão (ID)/ELISA/western blotting e também análise de frações cromatográficas de Sephadex G-1 e G-2 por ELISA A atividade hemolítica foi estudada em duas etapas: na primeira foram utilizadas hemácias de carneiro e, na segunda, hemácias de camundongo e anticorpos de camundongo anti-CFA e anti-hemácia de camundongo sensibilizada com CFA (anti-He-CFA) Na segunda etapa, amostras de CFA na forma nativa, CFA aquecido (56 oC, 3 min) ou tratado com anti-He-CFA e as frações obtidas por cromatografia de CFA em coluna de Sephadex G-2, foram analisadas pelo teste de hemólise Adicionalmente, a reatividade de anti-He-CFA e anti-CFA com antígeno CFA foi analisada por ELISA utilizando frações de cromatografia de G-2 ou por western blotting Os resultados da primeira etapa demonstraram um pico de reatividade das frações de CFA em Sephadex G-1 e dois picos de reatividade em Sephadex G-2 com soro imune de coelho Os resultados de western blotting mostraram que anti-CFA de coelho reconheceram várias bandas com MM distintas, sendo o perfil diferenciado em relação ao preparado antigênico A análise de atividade hemolítica resultou em lise das hemácias de carneiro Utilizando eritrócitos de camundongo foi observada atividade lítica similar com CFA na forma nativa e CFA aquecido, e diminuição da atividade com amostras de CFA tratadas com anti-He-CFA, sugerindo especificidade dos anticorpos aos fatores responsáveis pela hemólise Atividade hemolítica foi observada nas frações obtidas por cromatografia em Sephadex G-2, também positivas com IgG de camundongo anti-He-CFA por ELISA Western blotting resultou em duas bandas principais com MM ~252 kDa e ~79 kDa reconhecidas por IgG de camundongo anti-He-CFA Conclui-se que o fungo A kalrae libera pelo menos dois componentes principais com antigenicidade, imunogenicidade e atividade hemolítica, os quais são termoestáveis e com MM > 2 kDa e ~79 kDapt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: In this study, soluble components of Arthrographis kalrae have been investigated for immunogenicity/antigenicity and hemolytic activity For immunogenicity/antigenicity assays, A kalrae cell-free antigens (CFA), sonicated antigens (SA) and rabbit anti-CFA by immunodiffusion (ID)/enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)/western blotting (WB) were used in addition to Sephadex G-1 and G-2 chromatography fractions analysis by ELISA The hemolytic activity was performed with either sheep red blood cells (SRBC) or mouse red blood cells (MRBC) and mouse anti-CFA and mouse anti- MRBC sensitized with CFA (anti-MRBC-CFA) For mouse, CFA in its native form, previously heated CFA (56 ºC, 3 min) (hCFA) or treated with anti-MRBC-CFA and CFA Sephadex G-2 chromatography fractions were analyzed by hemolytic assay Additionally, the reactivity of the anti-MRBC-CFA or anti-CFA with CFA Ags was analyzed by ELISA using Sephadex G-2 chromatography fractions or by WB The results using rabbit serum demonstrated one peak of reactivity in fractions of Sephadex G-1 and two peaks of reactivity in Sephadex G-2 for CFA antigens Results of WB showed that rabbit anti-CFA recognized several bands with distinct MM, being the profile differentiated in respect to the antigen preparation Analysis of hemolytic activity resulted in lyses of the SRBC Using MRBC, hemolytic activity was observed with CFA and hCFA and hemolytic activity decreased with CFA anti-MRBC-CFA treated samples, suggesting specificity of the antibodies to the factors responsible for hemolysis Hemolytic activity was observed in chromatography G-2 fractions, also positive with anti-MRBC-CFA by ELISA WB resulted in two main bands with MM ~252 kDa and ~79 kDa recognized by anti-MRBC-CFA In conclusion, A kalrae releases at least two main components with antigenic, immunogenic and with hemolytic activity, which are thermostable with MM > 2kDa and ~79 kDapt_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Microbiologia) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Microbiologiapt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/11716
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenameMicrobiologiapt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Biológicaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Microbiologiapt_BR
dc.subjectMicrobiologiapt_BR
dc.subjectMicroorganismos patogênicospt_BR
dc.subjectTeste imunoenzimáticopt_BR
dc.subjectMicrobiologypt_BR
dc.subjectPathogenic microorganismspt_BR
dc.subjectEnzime immunoassaypt_BR
dc.titleCaracterização parcial de fator(es) hemolítico(s) de Arthrographis kalraept_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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