Diagnóstico molecular de paracoccidioidomicose pela técnica LAMP e avalação de nova formulação antifúngica complexo anfotericina B-7-dehidrocolesterol

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dc.contributor.advisorItano, Eiko Nakagawa [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorTatibana, Berenice Tomokopt_BR
dc.contributor.bancaHirooka, Elisa Yokopt_BR
dc.contributor.bancaVenâncio, Emerson Josépt_BR
dc.contributor.bancaLinhares, Rosa Elisa Carvalhopt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T13:48:06Z
dc.date.available2024-05-01T13:48:06Z
dc.date.created2009.00pt_BR
dc.date.defesa17.07.2009pt_BR
dc.description.abstractResumo: Paracoccidioidomicose (PCM) é epidemiologicamente uma das mais importantes micoses da América latina, especialmente no Brasil A doença ocorre por inalação do fungo Paracoccidioides brasiliensis (P brasiliensis) e o foco primário ocorre no pulmão do hospedeiro A PCM pode ser diagnosticada por observação direta da forma característica leveduriforme em amostra clínicas ou de cultura De forma mais frequente, o diagnóstico é feito de forma indireta por exames sorológicos, principalmente por imunodifusão e teste imunoenzimático O diagnóstico da PCM fora dos países endêmicos é difícil Necessita-se desenvolver um diagnóstico mais rápido e específico para PCM A amplificação circular isotérmica (LAMP) foi usada no presente estudo para detecção da presença de P brasiliensis em amostras de escarro de pacientes com PCM crônica, suspeitos para PCM e controle negativo O gene alvo gp43 de P brasiliensis foi amplificado em menos de quatro horas em 11 amostras de escarro O método LAMP possui a vantagem da velocidade e simplicidade quando comparado aos diagnósticos clássicos como o histopatológico ou cultura de material biológico e não requer aparato técnico sofisticado Pode constituir-se em um importante auxílio nos casos onde o estabelecimento do tratamento rápido pode significar a sobrevida do paciente, especialmente naqueles imunossuprimidos Apesar dos avanços significativos em muitas áreas da micologia médica, a PCM permanece com um tratamento de consenso ainda não estabelecido e assim representa a oitava causa comum de morte em doenças predominantemente crônicas ou reemergentes, entre as infecciosas e parasitárias e a mais elevada taxa de mortalidade entre as micoses sistêmicas A anfotericina B (AMB) permanece como a principal escolha terapêutica para micoses severas No entanto, sua utilização é limitada pela toxicidade Para melhorar a eficácia terapêutica e reduzir a toxicidade da AMB em altas doses, muitas estratégias incluindo a utilização de mudança no sistema de veiculação da droga têm sido utilizadas O complexo anfotericina B-7-dehidrocolesterol (AMB-7DC) é uma nova estratégia para AMB para redução de sua toxicidade, utilizando como solvente HCO-6, tornando-se mais hidrossolúvel e resistente às variações térmicas Este trabalho apresenta dados preliminares da avaliação de AMB-7DC em relação a anfotericina B comercial (AMB-D, Fungizona) Parâmetros in vitro de concentração inibitória mínima (MIC) e teste de hemólise em eritrócito de carneiro foram utilizados Testes in vivo avaliaram a LD5 das drogas, o CFU de pulmão em PCM murina, e a taxa de sobrevivência em modelo agudo de criptococose Os resultados indicaram uma baixa toxicidade in vitro para AMB-7DC que não foi hemolítica nas concentrações testadas enquanto a AMB-D mostrou atividade hemolítica O MIC demonstrou sensibilidade para ambas as drogas ao Cryptococcus neoformans Os resultados in vivo em relação ao CFU mostraram resultados semelhantes na PCM para ambas as drogas, não havendo erradicação do fungo Já os dados da criptococose foram favoráveis ao grupo tratado com AMB-D, havendo dose dependência para ambas O presente estudo indica que AMB-7DC possui potencial de utilização e, sendo assim, mais estudos são indicados para sua melhor avaliaçãopt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Paracoccidioidomycosis (PCM) is one of the most epidemiological important systemic mycoses in Latin America, especially in Brazil The disease is thought to be acquired by inhaling P brasiliensis fungi and the primarily infection is in the host’s lungs PCM can be diagnosed by direct observation of the characteristic yeast forms in clinical specimens or in culture More frequently, diagnosis is inferred from indirect evidence obtained via serological exams, mainly immunodiffusion and immunoenzymatic assays The diagnosis of PCM is sometimes difficult outside endemic countries, since the disease is uncommon Certain and rapid diagnosis for PCM is eagerly requested The loop mediated isothermal amplification method (LAMP) was used in the present study to detect the presence of P brasiliensis in sputa samples from patients with chronic PCM, suspected PCM and a negative control The target P brasiliensis gp43 gene was amplified in less than four hours in 11 sputa samples The LAMP method has the advantage of speed and simplicity compared to the classic diagnostic methods such as the histopathological test or biological material culture and did not require sophisticated technical apparatus It would be an important aid in cases where immediate treatment would mean patient survival, especially in immune suppressed patients Despite the significant advances in medical mycology areas of knowledge, no adequate treatments have yet been established for PCM and it represents the eighth most common cause of death from predominantly chronic or recurrent types of infectious and parasitic disease Amphotericin B (AMB) remains the principal therapeutic choice for severe mycosis However, its application is limited by toxicity To improve the therapeutic efficacy and to reduce the toxicity of AMB even at high doses, several strategies including the use of the changes in the drug delivery system have been used The complex amphotericin B-7-dehydrocolesterol (AMB-7DC) is a new and water soluble strategy to AMB reduce toxicity This study presents the preliminary data of evaluation the AMB-7DC compared to commercial Amphotericin B (AMB-D, Fungizone) In vitro parameters of minimum inibitory concentration (MIC) and hemolysis test in sheep erythrocytes were used Tests assessed in vivo the DL5 of the drugs, lung CFU in murine paracoccidioidomycosis and the test range of survival in an acute cryptococcosis model The results indicated the lower in vitro toxicity of AMB-7DC that was not hemolitic in tested concentrations; while the AMB-D revealed hemolitic activity The MIC demonstrated the sensibility of C neoformans to both drugs The results were similar in vivo for CFU in paracoccidioidomycosis, for both drugs but the fungi were not eradicated The cryptoccocosis evaluations demonstrated more survival time for the AMB-D group and there was dose dependence for both drugs The present study indicated that AMB-7DC is potentially useful, and therefore further evaluation of this compound is warrantedpt_BR
dc.description.notesTese (Doutorado em Microbiologia) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Microbiologiapt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/12079
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeDoutoradopt_BR
dc.relation.coursenameMicrobiologiapt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Biológicaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Microbiologiapt_BR
dc.subjectMicrobiologiapt_BR
dc.subjectParacoccidioidomicosept_BR
dc.subjectParacoccidioides brasiliensispt_BR
dc.subjectMicrobiologypt_BR
dc.subjectParacoccidioidomycosispt_BR
dc.titleDiagnóstico molecular de paracoccidioidomicose pela técnica LAMP e avalação de nova formulação antifúngica complexo anfotericina B-7-dehidrocolesterolpt_BR
dc.typeTesept_BR

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