Efeito terapêutico e mecanismos de ação da resolvina d5 em modelos de artrite

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dc.contributor.advisorVerri Júnior, Waldiceu Aparecido
dc.contributor.authorManchope, Marília Fernandes
dc.contributor.bancaFerraz, Camila Rodrigues
dc.contributor.bancaKwasniewski, Fábio Henrique
dc.contributor.bancaRibeiro, Felipe Pinho
dc.contributor.bancaPinto, Larissa Garcia
dc.coverage.extent170 p.
dc.coverage.spatialLondrina
dc.date.accessioned2024-07-25T17:45:28Z
dc.date.available2024-07-25T17:45:28Z
dc.date.issued2021-09-22
dc.description.abstractA dor e inflamação articular acomete pacientes com artrite reumatoide (AR), ou que passaram por um procedimento que falhou de artroplastia/implante e tratamentos mais eficazes são necessários nestes casos. Utilizou-se neste trabalho dois modelos experimentais: 1) artrite induzida pelo antígeno albumina de soro bovino metilada (mBSA) em camundongos imunizados com mBSA emulsificado em CFA ou IFA; 2). artrite crônica induzida por dióxido de titânio (TiO2). Como abordagem terapêutica utilizou-se a resolvina (Rv)D5, que é um mediador lipídicos pró-resolução, e estes mediadores possuem potente ação resolutiva da inflamação e induzem analgesia prolongada. Camundongos C57BL/6 (20-25g) foram pré-tratados com RvD5 [3, 10 e 30 ng, i.p.) 30 minutos antes do desafio intra-articular (i.a.) com mBSA (100 µg). A hipersensibilidade mecânica e edema foram avaliados (1-24h) após o desafio, e infiltrado de neutrófilos (9-48h). Avaliou-se 24h após o desafio, a ativação de neurônios do gânglio da raiz dorsal (GRD) e expressão de RNAm para os canais TRPV1 e Nav1.8. Determinou-se no GRD 9h após o desafio: i) níveis do peptídeo B?B, iii) porcentagem de p-NF?relacionado ao gene da calcitonina (CGRP), ii) p-NF na população de neurônicos CGPR+ . Na medula espinal, 9h após desafio avaliou-se a expressão de RNAm para GFAP, Olig-2, Iba-1, CX3CR1, ST2, IL-33, TNFa, pro-IL 1ß e IL-10. Utilizou-se um protocolo prolongado consistindo de 2 desafios i.a. com mBSA primeiro no tempo zero e após 120h. Os animais foram pré-tratados 30 minutos antes do primeiro desafio e o tratamento com RvD5 repetido a cada 48h. A hipersensibilidade mecânica e edema foram avaliados diariamente até 240h após o primeiro desafio com mBSA nos camundongos. No contexto da artrite crônica induzida por TiO2, camundongos Swiss ou LysM-eGFP / CCR2-RFP (20-25g) foram tratados com RvD5 (1, 3 e 10 ng, i.p.) e 24h após o estímulo i.a. com TiO2 (3mg), e o tratamento repetido a cada 72h. Fenótipo da artrite (comportamento nociceptivo e edema articular) foi avaliado ao longo de 30 dias. Após 30 dias avaliou-se, o dano histopatológico, recrutamento de leucócitos, estresse oxidativo, e RNAm para gp91phox , iNOS TNFa, pró-IL-1ß. In vitro utilizou-se macrófagos derivados da medula óssea, as células foram pré-tratados por 12h com RvD5 (0,1-100 ng/ml), primados com LPS e exposto ao TiO2. O sobrenadante foi utilizado para dosagem de TNFa, IL-1ß por ELISA, lactato desidrogenase, e os macrófagos para a translocação B por imunofluorescência. A RvD5 induziu analgesia e efeito anti inflamatório em ambos os modelos avaliados, reduzindo a hipersensibilidade?nuclear de p-NF mecânica, térmica, edema e alteração na distribuição do peso corpóreo das patas traseiras do camundongo. Na AR, a RvD5 reduziu a ativação neuronal, a ativação de neurônicos CGRP+ no GRD, inibiu a neuroinflamação na medula espinal reduzindo a ativação de células da glia e expressão de citocinas e o receptor ST2. Já na artrite crônica induzida por TiO2 RvD5 inibiu o infiltrado de leucócitos Lysm+ e CCR2+ , estresse oxidativo articular, expressão de RNAm para TNFa e pro-IL-1ß in vivo e B induzidos por TiO2 in vitro. Portanto a RvD5?produção de TNFa e ativação do NF é uma abordagem terapêutica promissora no contexto da dor articular, minimizando a dor e inflamação, e modulando mecanismos inflamatórios periféricos e mecanismo sensoriais de camundongos acometido com dor articular.
dc.description.abstractother1Patients with rheumatoid arthritis (RA) or that went through an arthroplasty/implant procedure that failed suffer from arthritic pain and inflammation, and new treatment are needed. In this work, we used two experimental models: 1) arthritis induced by methylated bovine serum albumin (mBSA) challenge in immunized mice; 2) chronic arthritis induced by titanium dioxide (TiO2) in mice. Resolvin (Rv) D5 was used as a therapeutic approach because it is a specialized pro-resolving mediator. These kinds of mediators have potent proprieties of inflammation resolution and prolonged analgesia. C57BL/6 mice (20-25g) were pre-treated with RvD5 [3, 10 e 30 ng, (intraperitoneally) i.p.] 30 minutes before mBSA intra-articular (i.a.) challenge (100 µg). Mechanical hypersensitivity and edema were evaluated (1-24h), neutrophilic infiltration (9-48h) after mBSA challenge. At 24h after mBSA challenge, neuronal activation was evaluated in neurons from dorsal root ganglion (DRG) and mRNA expression for TRPV1 and Nav1.8 ion channels. At the DRGs 9h after challenge it B, iii)?was evaluated: i) calcitonin gene-related peptide (CGRP) levels, ii) p-NF B in CGRP+ neurons by immunofluorescence. At the spinal cord?percentage of p-NF 9h after challenge, mRNA expression was evaluated for GFAP, Olig-2, Iba-1, CX3CR1, ST2, IL-33, TNFa, pro-IL-1ß, and IL-10. A prolonged protocol with two i.a. mBSA challenges 120 h apart from each other was used for mechanical hypersensitivity and edema assessment in arthritic mice up to 240h after the first challenge. In chronic arthritis induced by TiO2, swiss and LysM-eGFP / CCR2-RFP mice (20-25g) were treated with RvD5 (1, 3 e 10 ng, i.p.) 24h after TiO2 stimulus (3mg, i.a.), the treatment was repeated every other 72h. Arthritis phenotype (nociceptive behaviour and edema) was assessed throughout 30 days. After 30 days was assessed in the joint histopathological damage, leukocytes recruitment, oxidative stress, and mRNA expression for gp91phox e iNOS TNFa, pro-IL-1ß. Bone-marrow derived macrophages were pre-treated for 12h with RvD5 (0,1-100 ng/ml), primed with LPS, and exposed to TiO2. The supernatant was used for TNFa, IL-1ß, and B nuclear?lactate dehydrogenase assessment, and in the macrophages for p-NF translocation by immunofluorescence. RvD5 induced analgesia and anti-inflammatory activities in both models used here by decreasing mechanical and thermal hypersensitivity, edema, and static weight distribution in the rear paws of mice. In RA, RvD5 inhibited neuronal activation assessed by calcium imaging, CGRP levels, and neuronal activation of CGRP+ neurons in the DRG. RvD5 inhibited neuroinflammation at the spinal cord by reducing glial cells markers, cytokines, and ST2 receptor mRNA expression. In chronic arthritis induced by TiO2, RvD5 inhibited histopathological damage, leukocyte infiltration of Lysm+ e CCR2+ cells, oxidative stress, mRNA expression of TNFa e pro-IL-1ß in vivo, and the release of TNFa in the supernatant B nuclear translocation induced by TiO2 in vitro. Thus, RvD5 is a?and p-NF conceivable approach to inhibit arthritic pain by modulating peripheral inflammation and sensorial mechanism in mice affected.
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/17083
dc.language.isopor
dc.relation.departamentCCB - Departamento de Biologia Geral
dc.relation.institutionnameUniversidade Estadual de Londrina - UEL
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Patologia Experimental
dc.subjectArtrite
dc.subjectInflamação
dc.subjectDor crônica
dc.subjectMediadores lipídicos pró-resolução
dc.subjectNocicepção
dc.subjectArtrite reumatóide - Efeito terapêutico
dc.subject.capesCiências da Saúde - Medicina
dc.subject.keywordsArthritis
dc.subject.keywordsInflammation
dc.subject.keywordsChronic pain
dc.subject.keywordsSpecialized pro-resolving mediators
dc.subject.keywordsNociception
dc.subject.keywordsRheumatoid arthritis - Chronic pain
dc.titleEfeito terapêutico e mecanismos de ação da resolvina d5 em modelos de artrite
dc.title.alternativeTherapeutical effect and mechanism of action of resolvin D5 in models of arthritis
dc.typeTese
dcterms.educationLevelDoutorado
dcterms.provenanceCentro de Ciências Biológicas

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