Clonagem e caracterização de promotores de três isoformas de expansinas de Coffea arabica
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Resumo
Resumo: A maturação de frutos do cafeeiro é um processo bioquímico e fisiológico que altera cor, sabor aroma e textura Esses processos envolvem a expressão de diferentes enzimas e proteínas tais como as expansinas, responsáveis por promoverem o relaxamento da parede celular A caracterização do padrão de expressão de expansinas do cafeeiro (CaExp1, 2 e 3) em diferentes tecidos do fruto despertou o interesse no estudo da região promotora desses genes Deste modo este trabalho teve por objetivo clonar as regiões promotoras dos genes, CaExp1, CaExp2 e CaExp3 de C arabica em duas cultivares IAPAR 59 e IAPAR 59 Graúdo; comparar e caracterizar in silico as regiões promotoras assim como validar a função do promotor (ProCaExp2) Os fragmentos dos promotores foram gerados utilizando o kit Genome Walker e ligados ao vetor PCR 21–TOPO As sequencias foram comparadas utilizando os bancos de dados: PLACE, RegSite, MatInspector e PlantCare A análise in silico dos promotores revelou a presença de motivos de resposta a luminosidade nos quatro promotores Também foi observada a presença de motivos para fitorreguladores como etileno e auxina no ProCaExp2 e ABA, Brassinosteróides e GA nos ProCaExp1 e ProCaExp3 O ProCaExp2 foi fusionado ao gene GUSA e inserido via A tumefaciens no tomateiro A análise histomíquica do gene GUSA foi realizada em diferentes tecidos das plantas transformadas e controles não transformados A análise da expressão do gene GUSA demonstrou que o ProCaExp2 direciona a expressão do gene para o endosperma antes do início da maturação e para o endosperma e polpa durante a maturação do fruto A disponibilidade de promotores específicos é uma importante ferramenta biotecnológica para direcionar a expressão de genes para os frutos sem interferir em outros processos metabólicos das plantas
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Palavras-chave
Café, Melhoramento genético, Genética, Expressão, Café, Breeding, Expression, Ripening, Molecular cloning, Plants - Coffee, Genes