Transformação genética de Candida spp via Agrobacterium tumefaciens

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dc.contributor.advisorFurlaneto, Márcia Cristina [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorOliveira, Marcelo Tempestapt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T13:09:16Z
dc.date.available2024-05-01T13:09:16Z
dc.date.created2007.00pt_BR
dc.date.defesa25.05.2007pt_BR
dc.description.abstractResumo: Este trabalho descreve o estabelecimento de um sistema de transformação eficiente para as espécies de leveduras oportunistas Candida albicans, C tropicalis e C glabrata, importantes patógenos humanos, pelo emprego da metodologia de transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens As células fúngicas foram transformadas em diferentes condições de co-cultivo utilizando o vetor binário pBTS-4, que contém o gene de resistência ao antibiótico Higromicina B (hph) como marcador de seleção Nossos resultados indicam uma freqüência de transformação para C albicans, C tropicalis e C glabrata de até 1471, 1612 e 83 transformantes obtidos por co-cultivo, respectivamente Após quatro repiques em meio não seletivo, todos os transformantes analisados cresceram quando expostos novamente ao meio de seleção, sendo desta forma 1% estáveis mitóticamente A PCR e o dot-blot confirmaram molecularmente a transformação das espécies de Candida, gerando o produto de amplificação esperado de 6pb, e hibridado positivamente com os transformantes quando o mesmo foi utilizado como sonda A habilidade da linhagem AGL-1 em aderir às células fúngicas nas condições de co-cultivo foi observada através do emprego de microscopia eletrônica de varredura e transmissão A reprodutibilidade do sistema de transformação descrito neste trabalho pode fornecer um método para a manipulação genética destes patógenos que irá facilitar a análise molecular detalhada destas espécies fúngicaspt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: This paper describes the establishment of an efficient transformation system for the opportunistic yeasts species C albicans, C tropicalis and C glabrata, by the employment the Agrobacterium-mediated transformation method (AMT) Yeast cells were transformed to hygromycin B resistance using the binary vector pBTS4 carrying a hygromycin B resistance gene (hph) as a selection marker under different co-cultivation conditions Overall, our data indicate a transformation frequency of up to 1472, 1612 and 83 transformants/co-cultivation for C albicans, C tropicalis and C glabrata, respectively Following 4 serial passages of transformants on non-selective medium, 1% of the transformants were found to be mitotically stable for the selection mark PCR and dot-blot targeted at a 6 bp fragment from hph gene confirmed the transformation of Candida species The ability of Agrobacterium strain AGL-1 to attach to Candida cells under co-cultivation was analysed under scanning and transmission electron microscopy The reproducible transformation system described in this work may provide a method for the genetic manipulation of these pathogens, which will facilitate detailed molecular analysis of these fungal speciespt_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Microbiologia) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Microbiologiapt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/10981
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenameMicrobiologiapt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Biológicaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Microbiologiapt_BR
dc.subjectCandidapt_BR
dc.subjectGenética microbianapt_BR
dc.subjectTransformação bacterianapt_BR
dc.subjectAgrobacteriumpt_BR
dc.subjectMicrobial geneticspt_BR
dc.subjectBacterial transformationpt_BR
dc.subjectAgrobacteriumpt_BR
dc.titleTransformação genética de Candida spp via Agrobacterium tumefacienspt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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