Expressão e caracterização da região C-terminal da subunidade Rrp44 do complexo exossoma de Trypanosoma cruzi

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dc.contributor.advisorLioni, Lucy Megumi Yamauchi [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorSantos, Pollyana Myrella Capela dospt_BR
dc.contributor.bancaSouza, Tatiana de Arruda Campos Brasil dept_BR
dc.contributor.bancaMorey, Alexandre Tadashipt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T14:23:59Z
dc.date.available2024-05-01T14:23:59Z
dc.date.created2014.00pt_BR
dc.date.defesa17.04.2014pt_BR
dc.description.abstractResumo: Trypanosoma cruzi é um parasito heteroxênico com um complexo ciclo biológico envolvendo hospedeiros vertebrados e invertebrados Ao contrário de outros eucariotos, seus genes estão organizados em unidades policistrônicas sem promotores típicos para a RNA polimerase II, a transcrição ocorre de forma contínua e a regulação da expressão gênica quase que totalmente, em nível pós-transcricional Entre as estruturas responsáveis pela regulação pós-transcricional nesses parasitos, encontra-se o exossoma, um complexo multiprotéico com capacidade de degradação 3’-5’ de diferentes tipos de RNA Dentre as proteínas de atividade catalítica componentes desse complexo, a subunidade Rrp44 exibe a principal atividade de exoribonuclease e endonuleotídica Deste modo, este trabalho teve como objetivo a expressão da região C-terminal da subunidade Rrp44 de T cruzi no vetor pGEX-3X, a caracterização molecular através de ensaios de Northern e Southern blot e a localização por imunofluorescência em diferentes formas do parasito A proteína recombinante expressa apresentou cerca de 62 kDa Anticorpos policlonais, obtido por imunização de camundongos, reconheceram uma proteína de cerca de 1 kDa em extratos proteicos de forma tripomastigotas A imunolocalização da proteína nativa em formas epimastigotas e tripomastigotas mostrou que a proteína está distribuída pelo citoplasma e, em menor quantidade, também pelo núcleo do parasito A análise genômica por Northern blot e Southern blot mostrou, respectivamente, que o gene TcRrp44 apresenta um perfil de hibridação simples típico de gene presentes em poucas cópias, e um transcrito de cerca de 3 kb em todas as formas do parasito, indicando um gene constitutivopt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Trypanosoma cruzi is a heteroxenic parasite with a complex life cycle involving vertebrate and invertebrate hosts Unlike other eukaryotes, its genes are organized in polycistronic units without any typical RNA polymerase II promoters Transcription occurs continuously, with gene expression regulation, almost entirely, at the post- transcriptional level The exosome is a multiproteic complex with 3-5' degradation ability of different types of RNA, and seems to be the main structure responsible for the post-transcriptional regulation in eukaryotes Among the eleven components of this complex, seems to display its main exoribonucleolytic and endonucleolytic activity This subunit has already been intensively characterized in yeasts, humans and Trypanosoma brucei Thus, in this work we describe the first study of this complex in T cruzi The gene TcRrp44, which showed 8% similarity with the subunit Rrp44 of T brucei, was cloned, expressed and characterized The expressed recombinant protein showed about 62 kDa Polyclonal antibodies obtained by immunization of mice recognized a protein of approximately 1 kDa in protein extracts of trypomastigote forms The serum against recombinant protein, obtained by immunization of mice, was used to react with protein extracts of T cruzi and resulted in recognition of 11 kDa polypeptides in trypomastigotes forms TcRrp44 immunolocalization in epimastigotes and trypomastigotes forms showed a nuclear and cytosolic localization The Northern blot analysis showed a transcript of the same size in all three forms of parasite, and the genomic organization analysis suggests a single or a few gene copies in the T cruzi genomept_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Microbiologia) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Microbiologiapt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/14060
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenameMicrobiologiapt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Biológicaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Microbiologiapt_BR
dc.subjectTripanossoma cruzipt_BR
dc.subjectAntígenos protéicospt_BR
dc.subjectGenéticapt_BR
dc.subjectExpressãopt_BR
dc.subjectBiologia molecularpt_BR
dc.subjectGenespt_BR
dc.subjectMolecular biologypt_BR
dc.subjectExpressionpt_BR
dc.titleExpressão e caracterização da região C-terminal da subunidade Rrp44 do complexo exossoma de Trypanosoma cruzipt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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