Efeito da adição de EGF ou FSH no cultivo in vitro de folículos pré-antrais equinos inclusos em fragmentos ovarianos

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dataload.collectionmapped02 - Mestrado - Ciência Animalpt_BR
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dc.contributor.advisorSeneda, Marcelo Marcondes [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorMax, Marilu Constantinopt_BR
dc.contributor.bancaAndrade, Evelyn Rabelopt_BR
dc.contributor.bancaGomes, Roberta Garbelinipt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T14:37:16Z
dc.date.available2024-05-01T14:37:16Z
dc.date.created2016.00pt_BR
dc.date.defesa04.02.2016pt_BR
dc.description.abstractResumo: O objetivo do presente trabalho foi testar a adição de diferentes concentrações de FSH ou EGF ao meio de cultivo in vitro por 2 ou 6 dias sobre o desenvolvimento de folículos pré-antrais inclusos em fragmentos ovarianos equinos Para tanto foram realizados dois experimentos No primeiro foram testadas diferentes concentrações de EGF (1, 5, 1 e 2 ng/mL) adicionadas ao meio de cultivo in vitro durante 2 dias Já o segundo utilizou concentrações de FSH (1, 5, 1 e 2 ng/mL) por 2 ou 6 dias de cultivo O protocolo a seguir foi o mesmo para os dois experimentos, diferenciando apenas as moléculas (EGF ou FSH) testadas Ovários (n=5) de éguas em anestro sazonal foram coletados em abatedouro local Fragmentos (n=6 EGF; n=11 FSH) de tecido ovariano com aproximadamente 3x3x1 mm foram obtidos de cada animal Um fragmento foi imediatamente fixado e processado para análise histológica (grupo controle; Dia), o restante dos fragmentos foram colocados em PBS suplementado com penicilina (2 UI/mL) e estreptomicina (2 mg/mL) a 4° C durante 1 hora (período de transporte até o laboratório) Os fragmentos foram cultivados in situ durante 2 dias (D2) ou 6 dias (D6) em MEM+ ou MEM+ acrescido de concentrações diferentes de FSH ou EGF, criando os seguintes grupos para cada experimento: controle (D); MEM+ (D2); MEM+ (D6); MEM+ 1 ng/mL FSH ou EGF (D2); MEM+ 1 ng/mL de FSH (D6); MEM+ 5 ng/mL de FSH ou EGF (D2); MEM+ 5 ng/mL de FSH (D6); MEM+ 1 ng/mL de FSH ou EGF (D2); MEM+1 ng/mL de FSH (D6); MEM+ 2 ng/mL de FSH ou EGF (D2); e MEM+ 2 ng/mL de FSH (D6) Os folículos pré-antrais foram avaliados por microscopia óptica e classificados de acordo com a fase de desenvolvimento (primordial, e em desenvolvimento) e a sua morfologia (normal ou degenerado) O modelo estatístico utilizado foi Teste Exato de Fisher (p<,5) No total foram avaliadas 1637 lâminas contendo 5818 cortes histológicos Somente 13,85% dos cortes avaliados apresentavam folículos estando estes em diferentes fases de desenvolvimento No primeiro experimento, após 2 dias de cultivo, os grupos cultivados com 2 ng/mL de FSH, tal como a concentração 1 ng/mL no cultivo por 6 dias apresentaram as melhores taxas de folículos em desenvolvimento comparando-os aos demais tratamentos Em relação à integridade, os folículos pré-antrais na concentração de 1 ng/mL de FSH no cultivo por 2 dias e as concentrações de 5, 1 e 2 ng/mL de FSH no cultivo por 6 dias mostraram resultados superiores em relação ao restante dos grupos No segundo experimento, por dois dias de cultivo, as concentrações 1, 1 e 2 ng/mL de EGF proporcionaram melhores taxas de desenvolvimento folicular em comparação com os demais tratamentos (controle D, 5 e MEM+) Ao avaliar as taxas de folículos totais íntegros os tratamentos com 1 e 2 ng/mL de EGF obtiveram melhores resultados Desta maneira concluímos que a adição de FSH por 2 ou 6 dias ou EGF por 2 dias ao meio de cultivo in vitro de folículos pré-antrais equinos foram eficientes em promover o desenvolvimento e manter integridade folicularpt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: The aim of this study was to evaluate the addition of different concentrations of FSH or EGF in equine preantral follicles through in vitro culture Therefore, we conducted two experiments The first one was conducted to test different concentrations of EGF (1, 5, 1 and 2 ng / mL) added to the medium in vitro culture for 2 In the second one we used concentrations of FSH (1, 5, 1 and 2 ng / mL) for 2 or 6 days of culture The standard protocol for both, except the inclusion of EGF or FSH, was as follows Ovaries (n = 5) from mares in seasonal anestrus were collected at a local slaughterhouse Ovarian tissue fragments (EGF n=6; FSH n = 11) of about 3x3x1 mm were obtained from each ovary One fragment was immediately fixed and processed for histological analysis (non cultured control, Day)- and, the remaining fragments were placed in PBS supplemented with penicillin (2 IU / mL) and streptomycin (2 mg / mL) at 4 ° C for 1 hour (period of transport to the laboratory) The fragments were cultured for 2 days in situ (D2) or 6 days (D6) in MEM or MEM+ plus different concentrations of FSH or EGF, creating the following groups for each experiment: control (D); MEM + (D2); MEM + (D6); MEM + 1 ng / mL EGF and FSH (D2); MEM + 1 ng / mL of FSH (D6); MEM + 5 ng / mL of FSH or EGF (D2); MEM + 5 ng / mL of FSH (D6); MEM + 1 ng / mL FSH and EGF (D2); MEM + 1 ng / mL of FSH (D6); MEM + 2 ng / mL FSH and EGF (D2); and MEM + 2 ng / mL of FSH (D6) Preantral follicles were evaluated by histology and classified according to the developmental stage (primary and developing) and morphology (normal or degenerated) The statistical model used was Fisher’s Exact Test (p<5) At total of 1,637 slides were evaluated, containing 5,818 tissue sections Only 138% of the evaluated sections presented follicles, which were at different stages of development The first experiment, after 2 days of culture, samples cultured with 2 ng / mL FSH showed the best follicle development rates compared to the other treatments, while after six days the best results were found with1 ng / mL FSH Regarding the integrity of preantral follicles, the group exposed to 1 ng / mL FSH for for 2 days and 5, 1 and 2 ng / mL FSH for 6 days showed better results in comparison relation to the other groups The second one, for two days of culture, concentrations 1, 1 and 2 ng / mL EGF provided the best developmental rates of follicles, when compared to the other treatments (D control 5 and MEM) We conclude that FSH for 2 or 6 days or EGF for 2 days added to the medium in vitro culture were effective in promoting follicular development in equine ovarian fragmentspt_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Ciência Animal) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animalpt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/14809
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenameCiência Animalpt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Agráriaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-graduação em Ciência Animalpt_BR
dc.subjectReprodução animalpt_BR
dc.subjectFolículos ovarianospt_BR
dc.subjectEquinopt_BR
dc.subjectAnimal reproductionpt_BR
dc.subjectEquinept_BR
dc.titleEfeito da adição de EGF ou FSH no cultivo in vitro de folículos pré-antrais equinos inclusos em fragmentos ovarianospt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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