Efeito analgésico, anti-inflamatório e antioxidante da PDX na dor e inflamação induzidas por ânion superóxido em camundongos

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dc.contributor.advisorVerri Júnior, Waldiceu Aparecido
dc.contributor.authorCarneiro, Jessica Aparecida
dc.contributor.bancaKwasniewski, Fábio Henrique
dc.contributor.bancaBorghi, Sergio Marques
dc.coverage.spatialLondrina
dc.date.accessioned2026-08-27T18:14:59Z
dc.date.available2026-08-27T18:14:59Z
dc.date.issued2024-08-09
dc.description.abstractAs espécies reativas de oxigênio (ERO) são fundamentais para a inflamação. Contudo, a geração exacerbada excede a capacidade antioxidante do organismo, resultando em injúrias teciduais. O uso de moléculas antioxidantes demonstra que as ERO são componentes chave na fisiopatologia da dor inflamatória. Neste contexto, o superóxido de potássio (KO2), um doador de ânion superóxido, induz inflamação e dor. Os mediadores lipídicos pró-resolução (SPMs) são moléculas bioativas derivadas do ácido graxos ?-6 e ?-3 que promovem a resolução da inflamação. A Protectina DX (PDX) demonstra atividade anti-inflamatória, antioxidante, pró-resolutiva e analgésica em diversos modelos. Tendo em vista essas características, nosso objetivo foi avaliar o efeito analgésico, anti-inflamatório e antioxidante da PDX em modelo de dor e inflamação induzido por KO2 em camundongos. Camundongos Swiss ou LysM-eGFP machos foram tratados com PDX (1, 3 ou 10 ng) ou salina estéril via intraperitoneal (i.p.), 1h antes da injeção de KO2 (30 µg via intraplantar [i.pl.] ou 1 mg [i.p.]). Excepcionalmente, nos testes comportamentais de sensibilidade mecânica e térmica basal e de atividade locomotora, o estímulo não foi administrado. O teste de von Frey eletrônico e o teste manual de filamentos de von Frey foram utilizados para avaliar a hiperalgesia e alodinia mecânica, respectivamente. A hiperalgesia térmica foi determinada pelo método de placa quente e pelo teste de Hargreaves. As medidas experimentais foram feitas nos tempos 0, 0.5, 1, 3, 5 e 7h após estímulo. A atividade locomotora foi avaliada por teste de rota-rod nos tempos 0, 0.5, 1, 3, 5 e 7h. A dor manifesta foi determinada pelo número de contorções abdominais; o número de sacudidas de pata e o tempo de lambida da pata; ao longo de 20 e 30 minutos após estímulo, respectivamente. O desbalanço na distribuição de peso corporal sobre as patas traseiras foi avaliado pelo static weight bearing nos tempos 0, 1, 3, 5 e 7h após estímulo. O recrutamento leucocitário foi avaliado a partir da coleta de amostras plantares 7h após estímulo, com análise em microscopia de luz (coloração em hematoxilina-eosina) e microscopia confocal (imunofluorescência). A produção de citocinas (IL-1ß e TNF-a) foi avaliada por ELISA, 4h após estímulo. O estresse oxidativo foi avaliado pelos ensaios colorimétricos de catalase (coleta 1h após estímulo), NBT, ABTS, FRAP e GSH (coleta 3h após estímulo). A ativação do canal TRPV1 e a ativação de neurônios DRG foram avaliadas em microscopia confocal, 5h após estímulo. O potencial efeito tóxico do tratamento agudo com PDX foi avaliado pelos ensaios de ALT, AST, ureia, creatinina e atividade da mieloperoxidase estomacal, 7h após estímulo. Como resultados, obtivemos que a PDX reduz os comportamentos de dor analisados (hiperalgesia, alodinia, dor manifesta e desbalanço na distribuição de peso corporal), sem alterar a sensibilidade e capacidade motora normal dos animais. Como mecanismo, demonstramos que a PDX inibe a ativação de TRPV1 e, consequentemente, do neurônio DRG, demonstrando um inédito mecanismo analgésico. Além disso, a PDX diminuiu os níveis de citocinas pró-inflamatórias (TNF-a e IL-1ß) e os níveis de ânion superóxido, além de aumentar a capacidade antioxidante tecidual, sem alterar os níveis plasmáticos de ALT, AST, creatinina e ureia, ou a atividade da mieloperoxidase estomacal. Desta forma, este estudo evidenciou a propriedade analgésica, anti inflamatória e antioxidante segura da PDX em modelo de dor e inflamação desencadeada por uma ERO, sugerindo este SPM como uma promissora alternativa terapêutica.
dc.description.abstractother1Reactive oxygen species (ROS) are fundamental to inflammation. However, their exacerbated generation exceeds the antioxidant capacity of the organism, resulting in tissue damage. The use of antioxidant molecules shows that ROS are crucial components in the pathophysiology of inflammatory pain. In this context, potassium superoxide (KO2), a superoxide anion donor, induces inflammation and pain. Specialized pro-resolving mediators (SPMs) are bioactive molecules derived from ? 6 and ?-3 fatty acids that promote the resolution of inflammation. Protectin DX (PDX) demonstrates anti-inflammatory, antioxidant, pro-resolving, and analgesic activities. Given these characteristics, we aimed to evaluate the anti-inflammatory, antioxidant, and analgesic effect of PDX in a model of pain and inflammation induced by KO2 in mice. Male Swiss or LysM-eGFP mice were treated with PDX (1, 3, or 10 ng) or sterile saline intraperitoneally (i.p.), 1 hour before injection with KO2 (30 µg intraplantar [i.pl.] or 1 mg [i.p.]). Exceptionally, for the behavioral tests of baseline mechanical and thermal sensitivity and locomotor activity, no stimulus was administered. The electronic von Frey test and the manual von Frey filament test were used to assess mechanical hyperalgesia and mechanical allodynia, respectively. Thermal hyperalgesia was determined using the hot plate method and the Hargreaves test. Experimental measurements were taken at 0, 0.5, 1, 3, 5, and 7 hours after stimulation. Locomotor activity was assessed using the rotarod test at 0, 0.5, 1, 3, 5, and 7 hours. Overt pain-like behaviors were determined by the number of abdominal writhings, paw flinches, and paw licking time, over 20 and 30 minutes after the stimulus, respectively. The unbalance in the body weight distribution over the hind paws was assessed by static weight bearing at 0, 1, 3, 5, and 7 hours after stimulation. Leukocyte recruitment was assessed by collecting plantar samples 7 hours after stimulation and analyzing them using light microscopy (hematoxylin-eosin staining) and confocal microscopy (immunofluorescence). Cytokine production (IL-1ß and TNF-a) was assessed by ELISA 4 hours after stimulation. Oxidative stress was evaluated by catalase (sampling 1 hour after stimulus), NBT, ABTS, FRAP and GSH (sampling 3 hours after stimulus) colorimetric assays. TRPV1 channel activation and DRG neuron activation were assessed by confocal microscopy 5 hours after stimulation. The potential toxic effect of acute treatment with PDX was assessed by ALT, AST, urea, creatinine and stomach myeloperoxidase activity assays, 7 hours after KO2 intraplantar injection. As a result, we obtained that PDX reduced the pain behaviors analyzed (hyperalgesia, allodynia, overt pain-like behavior, and imbalance in body weight distribution), without altering the normal sensitivity and motor capacity of the animals. As a mechanism, we demonstrated that PDX inhibits the activation of TRPV1 and, consequently, of the DRG neuron, demonstrating a new analgesic mechanism about this SPM. In addition, PDX decreased levels of pro-inflammatory cytokines (TNF-a and IL-1ß) and superoxide anion levels, as well as increased tissue antioxidant capacity, without altering plasma levels of ALT, AST, creatinine and urea, or stomach myeloperoxidase activity. Thus, this study emphasizes the safe analgesic, anti-inflammatory, and antioxidant properties of PDX in a model of pain and inflammation triggered by a ROS, indicating to this SPM as a promising therapeutic alternative.
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/19690
dc.language.isopor
dc.relation.departamentCCB - Departamento de Ciências Patológicas
dc.relation.institutionnameUniversidade Estadual de Londrina - UEL
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Patologia Experimental
dc.subjectMediadores Lipídicos Pró-Resolução
dc.subjectEspécies Reativas de Oxigênio
dc.subjectDor
dc.subjectInflamação
dc.subjectProtectinas
dc.subjectEstresse oxidativo
dc.subjectAnalgesia
dc.subjectAntioxidante
dc.subjectModelo experimental
dc.subject.capesCiências Biológicas - Biologia Geral
dc.subject.cnpqCiências Biológicas - Biologia Geral
dc.subject.keywordsSpecialized pro-resolving mediators
dc.subject.keywordsReactive oxygen species
dc.subject.keywordsPain
dc.subject.keywordsInflammation
dc.subject.keywordsProtectins
dc.subject.keywordsOxidative stress
dc.subject.keywordsAnalgesia
dc.subject.keywordsAntioxidants
dc.subject.keywordsExperimental model
dc.titleEfeito analgésico, anti-inflamatório e antioxidante da PDX na dor e inflamação induzidas por ânion superóxido em camundongos
dc.title.alternativeAnalgesic, anti-inflammatory and antioxidant effect of PDX on superoxide anion-induced pain and inflammation in mice
dc.typeDissertação
dcterms.educationLevelMestrado Acadêmico
dcterms.provenanceCentro de Ciências Biológicas

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