Purificação e caracterização estrutural de proteases produzidas pelo fungo entomopatogênico Beauveria bassiana CG432 ativado em insetos broca-do-café

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dc.contributor.advisorVaréa-Pereira, Geni [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorOliveira, Jakeliny Akemy Yamamoto dept_BR
dc.contributor.bancaIda, Elza Youkopt_BR
dc.contributor.bancaRibeiro, Mara Lúcia Luizpt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T13:09:46Z
dc.date.available2024-05-01T13:09:46Z
dc.date.created2008.00pt_BR
dc.date.defesa28.03.2008pt_BR
dc.description.abstractResumo: Beauveria bassiana é um fungo entomopatogênico isolado de insetos mortos na natureza e tem sido amplamente estudado devido a sua capacidade de infectar e matar várias espécies de insetos Os fungos apresentam uma vantagem em relação a outros entomopatógenos, pois não precisam ser ingeridos para causar a infecção Conídios infectantes penetram no exoesqueleto do inseto por meio da ação de enzimas hidrolíticas como proteases, quitinases e lipases produzidas em resposta a constituição da cutícula do inseto O objetivo deste trabalho foi purificar e caracterizar as proteases extracelulares produzidas pela cepa brasileira de B Bassiana CG432 previamente reativada em adultos de broca-do-café (Hypothenemus hampei) Para obtenção das proteases, a cepa CG432 foi cultivada em meio líquido basal contendo 1% de glucose, ,5% de extrato de levedura e inoculadas a 1% com uma suspensão 18 conídios/mL, a 28ºC e 15 rpm Os cultivos foram interrompidos no terceiro dia A purificação e caracterização das proteases extracelulares foram realizadas por ultrafiltração e cromatografia de exclusão molecular em gel Sephadex G-1 A atividade das proteases foi determinada em tampão glicina-NaOH 5 mM pH 9,5 por detecção de peptídeos solúveis liberados a 37ºC/3 min sobre soro albumina bovina pelo método de Hartree O fator de purificação obtido foi de 43, massa molecular de 23 kDa e 26 kDa por meio de eletroforese bidimensional PAGE-SDS, e ponto isoelétrico de 4,5, 56 % de ácido aspártico por cromatografia líquida de alta eficiência em coluna de fase reversa ODS-C18 e eluente tampão acetato-metanol (38:62) As proteases foram caracterizadas como serino proteases, com resíduos de cisteína, pois foram inibidas por fluoreto fenil-metil-sulfonil e ácido p-cloromercúriobenzóico As proteases do Pico II apresentaram Km 4x1-4 M sobre substrato tipo-subtilisinapt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Beauveria bassiana is an entomopathogen fungi isolation of death insects in nature and have been widely studied which had its capacity of infect and killing many insects species Fungus present advantage regarding to other entomopathogens, therefore they do not need to be ingested to cause infection Conidia to infect penetrating in insect exoeskeleton by hydrolytic enzymes action as proteases and chitinases and lipases produced in response organization insect cuticle The objective of this work was purified and characterizes extracellular proteases produced by the strain Brazilian B bassiana CG432, previously reactivated on adults of coffe berry borer (Hypothenemus hampei) To obtainment proteases the strain CG432 was cultivated in basal liquid medium containing 1% glucose and 5% yeast extract and inoculated 1% with a suspension 18 conidia/mL, at 28ºC, at 15 rpm The cultures were interrupted in third day The purification and characterization from structure of extracellular proteases was realizated by ultrafiltration, chromatography in gel Sephadex G-1 The activity proteases in buffer glycine-NaOH 5mM pH 95 for detection of free soluble peptídeos liberated 37ºC/3min on serum bovine albumen for the method of Hartree The factor of purification obtained was 43, molecular mass of 23 and 26k Da by means of eletroforese bidimensional PAGE-SDS, and isoelectric point of 45, 56 % of acid aspártic for liquid chromatography of high efficiency in column reversa phase ODS-C18 and eluente buffer acetate-methanol (38:62) The proteases were characterised proteases serine with residue cysteine on the basis of inhibition by phenylmethylsulphonyl fluoride and p-chlormercuricbenzoic acid Peak II proteases showed Km 4x1-4 M on subtilisin-like substratept_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Exatas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologiapt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/11063
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenameBiotecnologiapt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Exataspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-graduação em Biotecnologiapt_BR
dc.subjectEnzimas proteolíticaspt_BR
dc.subjectPurificaçãopt_BR
dc.subjectBeauveria bassianapt_BR
dc.subjectBroca-do-cafépt_BR
dc.subjectProteolytic enzymespt_BR
dc.subjectCoffee berry borerpt_BR
dc.subjectPurificationpt_BR
dc.titlePurificação e caracterização estrutural de proteases produzidas pelo fungo entomopatogênico Beauveria bassiana CG432 ativado em insetos broca-do-cafépt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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