Novo método para detecção de invasão de Escherichia coli a células HeLa

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dc.contributor.advisorKobayashi, Renata Katsuko Takayama [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorGonçalves, Marcelly Chuept_BR
dc.contributor.bancaFaccin-Galhardi, Ligia Carlapt_BR
dc.contributor.bancaPelayo, Jacinta Sanchezpt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T12:11:01Z
dc.date.available2024-05-01T12:11:01Z
dc.date.created2018.00pt_BR
dc.date.defesa27.02.2018pt_BR
dc.description.abstractResumo: Para estabelecer uma infecção bem-sucedida, os microrganismos desenvolveram estratégias para invadir as células do hospedeiro Esse mecanismo de patogenicidade garante um nicho patogênico privilegiado para a multiplicação do patógeno, protegendo-o de antimicrobianos e das respostas defensivas do hospedeiro Um dos mais importantes patógenos humano e o maior causador de infecções do trato urinário, Escherichia coli, ainda não possui seus mecanismos de invasão integralmente compreendidos O estudo dessas estratégias é fundamental para o desenvolvimento de alternativas de prevenção e tratamento desse tipo de infecções, e para isso o primeiro passo na pesquisa é detectar se a bactéria é capaz de invadir a células hospedeira As técnicas para a detecção de invasão bacteriana utilizadas hoje possuem desvantagens que atrasam o andamento das pesquisas, sendo laboriosas, demandando longa espera para obtenção de resultados e/ou de alto custo financeiro Assim, esse trabalho teve como propósito apresentar uma nova forma de detecção de invasão bacteriana em células de linhagem, baseada em um método enzimático fluorogênico O foco dessa técnica foi a detecção de invasão de E coli a células HeLa, explorando a ß-glucuronidase, enzima constitutiva específica dessa bactéria Essa enzima faz a hidrólise do substrato chave desse trabalho, 4-metilumbeliferil-ß-D-glucuronídeo (MUG), produzindo um composto fluorogênico, o 4-metilumbeliferona (4-MU) A curva de fluorescência criada através do método, analisada pelos teste estatísticos, demonstrou que a detecção de invasão pode ser feita após 5 horas de incubação com o MUG Quando amostras de E coli Uropatogênica e E coli provinda de microbiota de pessoas saudáveis foram testadas, o método proposto nesse trabalho apresentou resultados mais coerentes do que os resultados obtidos por detecção de invasão por contagem de colônias, utilizado na pesquisa atualmente A detecção pelo método enzimático fluorogênico, em comparação com outras técnicas de detecção de invasão bacteriana existentes, demonstrou ser uma alternativa mais acessível por ser menos laboriosa, com obtenção mais rápida de resultados, mais sensívelpt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: To establish a well-succeeded infection, microorganisms have developed strategies to invade host cells This pathogenicity mechanism ensures a privileged pathogenic niche for multiplication of the microorganism, protecting it against the action of antimicrobials and host immune response One of the most important human pathogens and the greatest cause of urinary tract infections, Escherichia coli, still do not have its invasion mechanisms fully understood Thus, the study of these strategies is essential for developing prevention and treatment alternatives aiming this type of infection, and for that, the first step in research is to detect whether or not the bacterium is capable to invade the host cell The techniques used today to detect bacterial invasion to cells have disadvantages, being laborious, demanding long waiting for results and/or high financial cost, which delay research progress This work aims to present a new approach for detecting bacterial invasion to lineage cells, based on an enzymatic-fluorogenic method The focus of this technique is the detection of E coli invasion to HeLa cells, exploring ß-glucuronidase, the specific constitutive enzyme of this bacterium This enzyme hydrolyses the key substrate of this work, 4-methylumbelliferyl-ß-D-glucuronide (MUG), producing a fluorogenic compound, 4-methylumbelliferone (4-MU) The fluorescence curve created by this method, analyzed by Tukey statistical test, demonstrated that this detection can be efficiently realized after 5 hours incubation with MUG When testing uropathogenic E coli and E coli isolated form human gastrointestinal microbiota, the proposed method presented results that were more logical than the results exhibited from detection by plate counting Detection by this enzymatic-fluorogenic method compared to other existing bacterial invasion detection techniques is less burdensome, faster, highly sensitive and an affordable alternative, due to not require high financial investmentpt_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Microbiologia) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Microbiologiapt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/9790
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenameMicrobiologiapt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Biológicaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Microbiologiapt_BR
dc.subjectEscherichia colipt_BR
dc.subjectCélulas HeLapt_BR
dc.subjectMicroorganismos patogênicospt_BR
dc.subjectInfecções urináriaspt_BR
dc.subjectHeLa cellspt_BR
dc.subjectUrinary tract infectionspt_BR
dc.titleNovo método para detecção de invasão de Escherichia coli a células HeLapt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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