i-ELISA como ferramenta avaliadora na otimização de imunoensaio e exposição experimental de ocratoxina a (OTA) em parâmetros hematológicos de pintainhos : : via oral versus inoculação subcutânea

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dataload.collectionmapped02 - Mestrado - Ciência de Alimentospt_BR
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dc.contributor.advisorHirooka, Elisa Yoko [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorShimizu, Cleverson Ferreirapt_BR
dc.contributor.bancaLopes, Daiane Diaspt_BR
dc.contributor.bancaIshikawa, Angélica Tiemept_BR
dc.contributor.coadvisorNakagawa, Eiko Itano [Coorientador]pt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T13:51:40Z
dc.date.available2024-05-01T13:51:40Z
dc.date.created2019.00pt_BR
dc.date.defesa16.04.2019pt_BR
dc.description.abstractResumo: O trabalho indica cuidados necessários para operação analítica – imunoensaio – empregando ELISA indireta (i-ELISA) como ferramenta avaliadora em testes de imunorreagentes e, procedimentos para análise de ocratoxina A (OTA) Embora OTA seja o principal análogo nefrotóxico e hepatotóxico do grupo, apresenta toxicidade e carcinogenicidade inferior a aflatoxina B1 O experimento consistiu de: (i) tendo como anticorpo primário o anticorpo monoclonal anti-OTA (AcManti-OTA) produzido por hibridoma linhagem OTA1, secretora de AcM - isotipo IgG1 kappa contra OTA, proceder i-ELISA com AcManti-OTA armazenado a -2°C Iniciando com a concentração de ,89 mg/mL e diluição de 1/1 do anticorpo primário, sendo que as avaliações consistiram desde testes perante direção de pipetagem, higienização da lavadora de microplaca, estabilidade de conjugado OTA-BSA e, comparação entre lotes de conjugado perante sensibilização de microplaca A melhor condição para i-ELISA consistiu de: conjugado OTA-BSA a 1 ng/mL em tampão bicarbonato ,1 mol L-1pH 9,6; diluição de anticorpo primário para 1/5; anticorpo secundário a 1/4; bloqueio com BSA a ,1% A avaliação de AcM perante produção, quantidade e viabilidade através de i-ELISA é fundamental para prosseguir com ensaios subsequentes A maximização do uso de AcM produzido no laboratório permite redução de custo (atingiu redução no fator de 5) e rejeitos, garantindo o fornecimento de reagente dependente de Kit importado de alto valor comercial (ii): o estudo comparativo de efeito no parâmetro hematológico de OTA em pintainho de linhagem Cobb consistiu de dois grupos submetidos a exposição oral e subcutânea O grupo de exposição oral consistiu de 42 aves, de 1 dia de idade, expostos a ração contaminada com OTA nas doses de , ,1; ,3; ,5; ,7; ,9 e 1,1 mg de OTA/kg de ração O grupo de exposição subcutânea consistiu de 36 aves, de 5 dias de idade expostos porinoculação subcutânea de OTA nas concentrações de , ,1; ,5; ,9; 1,3 e 1,7 mg de OTA/kg de peso corporal O grupo da via subcutânea apresentou maior alteração em células hematológicas, desde a dose de ,1 mg de OTA/kg, sugerindo efeito de OTA e respectivos metabólitos ao nível de medula óssea e órgãos linfóides Ie, a contaminação via subcutânea possivelmente não expôs OTA a biotransformaçãohepato-digestiva responsável pela detoxicação capaz de transformar em análogo com menor toxicidade; este fator poderia justificar a maior toxicidade hematológica por via subcutânea, em relação a contaminação via oralpt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: This research pounted-out the care required duringimmuno - analytical operation employing indirect ELISA (i-ELISA) as a evaluation tool to testimmunoreagents as well as the procedures for ochratoxin A (OTA) analysis Although OTA is the major nephrotoxic and hepatotoxic analogue inochratoxin group, its toxicity and carcinogenicity is lower than aflatoxin B1 The experiment was performed as: (i): usingas the primary antibody, the anti-OTA monoclonal antibody (anti-OTA MAb) produced by hybridoma OTA1 strain, which secretes isotype IgG1 kappa MAbagainst OTA, thei-ELISA was carried out with MAbagainst-OTA stored at -2°C The evaluation was started diluting the primary antibodyat 1/1, and it was consisted from test to evaluate the pipettingdirection, cleaning efficience microplate washer, stability of OTA-BSA conjugate and comparison of conjugate batch concerning microplate sensitization The best condition determined for i-ELISA was: 1 ng / mL of OTA-BSA conjugate in 1 mol L-1 bicarbonate buffer at pH 96; dilution of primary antibody at 1/5; secondary antibody at1/4; blocking with 1% BSA The evaluation of MAb prior to production, quantity and viability using i-ELISA is essential to carry out subsequent tests The maximization of the use of MAbproduced in the laboratory can reduce the cost (a reduction factor of 5 was reached) as well as the waste, guaranteeing the supply of reagent which is dependent on imported as high cost commercial Kit (ii) the comparative study concerning the effect of OTA in chicks haematological parameters was performed using two groups The oral exposure group consisted of 42 chicks of 1 day old, which ingested OTA contaminated feed at dosis of , 1; 3; 5; 7; 9 and 11 mg of OTA / kg of feed The subcutaneous exposure group was composed by 36 chicks of 5 daysold, that were subcutaneously inoculated with , 1; 5; 9; 13 and 17 mg OTA / kg of body weight The subcutaneous injection group showed more prominent change in hematological cells, which was evidenced from 1 mg of OTA / kgdosis, and suggested the effect of OTA and its metabolites at bone marrow and lymphoid organs level Ie, the subcutaneous route probably skiped the OTA hepato-digestive biotransformation usually responsible for detoxification by transforming into a lower toxicityanalogue; suchfeaturemay justify the higher hematological toxicity by subcutaneous route, when compared with oral routept_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Ciência de Alimentos) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciência de Alimentospt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/12298
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenameCiência de Alimentospt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Agráriaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Ciência de Alimentospt_BR
dc.subjectOcratoxinaspt_BR
dc.subjectMicotoxinaspt_BR
dc.subjectFrango de cortept_BR
dc.subjectTeste imunoenzimáticopt_BR
dc.subjectOchratoxinspt_BR
dc.subjectMycotoxinspt_BR
dc.subjectBroilers (Chickens)pt_BR
dc.subjectEnzyme-linked immunosorbent assaypt_BR
dc.titlei-ELISA como ferramenta avaliadora na otimização de imunoensaio e exposição experimental de ocratoxina a (OTA) em parâmetros hematológicos de pintainhos : : via oral versus inoculação subcutâneapt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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