Conjugação in vitro de Enterococcus sp. resistente à vancomicina

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dataload.collectionmapped02 - Mestrado - Microbiologiapt_BR
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dc.contributor.advisorFurlaneto, Márcia Cristina [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorTerra, Márcia Reginapt_BR
dc.contributor.bancaFurlaneto-Maia, Lucianapt_BR
dc.contributor.bancaBarcellos, Fernando Gomespt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T14:48:37Z
dc.date.available2024-05-01T14:48:37Z
dc.date.created2013.00pt_BR
dc.date.defesa18.12.2013pt_BR
dc.description.abstractResumo: O gênero Enterococcus tem grande importância na Microbiologia de Alimentos devido a sua utilização como probiótico e seu uso como cultura iniciadora No entanto, tem emergido como importante patógeno de infecções nosocomiais A resistência de Enterococcus à maioria dos antimicrobianos de escolha e também a vancomicina tem sido relatado como um problema de saúde mundial Enterococcus possui à habilidade natural de adquirir resistência a diferentes antimicrobianos por meio de transferência horizontal de genes, principalmente pela obtenção de plasmídeos de resistência via processo conjugativo, que conferem a capacidade de expressar fenótipos de resistência a diversas drogas Um dos principais genes de resistância a vancomicina detectados em Enterococcus é o gene vanA com isso o objetivo do presente estudo foi avaliar a transferência do gene vanA, via processo conjugativo, entre isolados de E faecium e E faecalis, em meio de cultura e em leite No presente estudo foi determinado o perfil genotípico e fenotípico de 3 isolados de Enterococcus spp por meio de reação em cadeia de polimerase (PCR) com os oligonucleotídeo iniciadores vanA, tetL, gelE e cpd e pela técnica de Concentração Inibitória Mínima(CIM) A transferência do gene vanA in vitro foi demonstrada em caldo Mueller Hinton e em leite reconstituído na razão de 1:1(doador: receptor), seguido de incubação a 37ºC, a 8 rpm, por 6 horas A cada 2 horas 1µl do co-cultivo foi semeado em ágar Mueller Hinton contendo Tetraciclina (16µg/mL) e Vancomicina (32µg/mL), e as placas foram incubadas a 37ºC por 18 horas, com posterior contagem de UFC/mL A frequência de transconjugantes foi obtida pela razão do número de transconjugantes pelo número de células doadoras utilizadas no co-cultivo A estabilidade plasmidial e a confirmação dos transconjugantes foi realizada PCR com os oligonucleotídios citados acima A mesma metodologia foi realizada com doador morto por aquecimento A análise do perfil genotípico e fenotípico nos proporcionou formar 3 pares, sendo 1 isolados doadores e 3 isolados receptores Foram obtidos transconjugantes do gene vanA em todos os pares e tempos testados No experimento de conjugação do gene vanA em MH a maior frequência obtida foi de 5,5x15 e a menor foi de ,3x15 UFC/mL, com duas horas de co-cultivo Não obtivemos transconjugantes com a técnica doador morto, excluindo assim o processo de transformação como método de transferência do gene Foi observado 1% de estabilidade com todos os pares A eficiência de Enterococcus em transferir o gene vanA leva a disseminação deste gene de resistência o que pode resultar no aumento da frequência de Enterococcus spp resistente à vancomicina, limitando cada vez mais as alternativas de terapêuticapt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: The genus Enterococcus is of great importance in Food Microbiology due to their use as probiotics and their use as starter culture However, it has emerged as an important pathogen of nosocomial infections The resistance of Enterococcus to most antimicrobials of choice and also to vancomycin has been reported as a global health problem Enterococcus has the natural ability to acquire resistance to antimicrobials through horizontal gene transfer, especially by obtaining plasmids resistance via conjugative process, conferring the ability to express phenotypic resistance to many drugs One of the key genes of vancomycin resistence detected in Enterococcus vanA gene is thus the aim of this study was to evaluate the transfer of the vanA gene, via conjugative process, among isolates of E faecalis and E faecium in culture medium and in milk In the present study we determined the phenotypic and genotypic profile of 3 isolates of Enterococcus spp by polymerase chain reaction (PCR) with oligonucleotide primers vanA, tetL, gelE and cpd and the technique of minimal inhibitory concentration (MIC) The vanA gene transfer in vitro was demonstrated in Mueller Hinton broth and milk reconstituted in a 1:1 ratio (donor: recipient), followed by incubation at 37 °C, 8 rpm for 6 hours Every two hours 1 µl of the co-culture was seeded on Mueller Hinton agar containing tetracycline (16µg/mL) and vancomycin (32µg/mL), and the plates were incubated at 37 ° C for 18 hours, with subsequent counting of CFU / mL The frequency of transconjugants was obtained by the ratio of the number of transconjugants by the number of donor cells used in co-cultivation The plasmid stability and confirmation of transconjugants PCR was performed with oligonucleotides mentioned above The same methodology was performed by heating dead donor The analysis of phenotypic and genotypic profile form provided in 3 pairs, 1 donors and 3 isolates isolated receivers Transconjugants were obtained of the vanA gene in all pairs and times tested In the experiment conjugation of the vanA gene in MH the highest frequency obtained was 3,5 x1-5 and the lowest was ,3 x1-5 CFU / mL, with two hours of co-cultivation No transconjugants obtained with the technique dead donor, thereby excluding the transformation process as the method of gene transfer It was observed 1 % stability for all pairs The efficiency of gene transfer in Enterococcus leads to dissemination of the vanA resistance gene which can result in increased frequency of Enterococcus spp vancomycin-resistant, limiting increasingly alternative therapypt_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Microbiologia) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Microbiologiapt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/15411
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenameMicrobiologiapt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Biológicaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Microbiologiapt_BR
dc.subjectEnterococcuspt_BR
dc.subjectDrogaspt_BR
dc.subjectResistência em microorganismospt_BR
dc.subjectGenética microbianapt_BR
dc.subjectConjugação (Biologia)pt_BR
dc.subjectDrug resistance in micro-organismspt_BR
dc.subjectConjugation (Biology)pt_BR
dc.subjectMicrobial geneticspt_BR
dc.titleConjugação in vitro de Enterococcus sp. resistente à vancomicinapt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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