Relação entre a superexpressão do receptor do fator de crescimento epitelial humano (HER-2) e estresse oxidativo em pacientes portadoras do câncer de mama

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dataload.collectionmapped02 - Mestrado - Patologia Experimentalpt_BR
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dc.contributor.advisorCecchini, Rubens [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorVictorino, Vanessa Jacobpt_BR
dc.contributor.bancaArmani, Alessandra Lourenço Cecchinipt_BR
dc.contributor.bancaPanis, Carolinapt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T13:11:42Z
dc.date.available2024-05-01T13:11:42Z
dc.date.created2012.00pt_BR
dc.date.defesa16.02.2012pt_BR
dc.description.abstractResumo: Introdução e objetivos: O câncer de mama é o tumor maligno mais letal em mulheres em todo o mundo, e durante o seu desenvolvimento, cerca de 2% dos pacientes apresentam superexpressão do receptor do fator de crescimento epidérmico humano-2 (HER2/neu, também conhecido como ErbB2) A família HER2 abrange quatro outros membros presentes na membrana celular como dímeros: HER1, HER2, HER3 e HER4 HER2 pode dimerizar com outro HER2 ou com HER1, HER3 ou HER4 A superexpressão desses receptores possuem sinalização prolongada e através de diferentes vias de sinalizações podem mediar diferentes fatores transcricionais que culminarão em diminuição de apoptose, aumento da sobrevivência celular, aumento da migração celular, progressão do tumoral, crescimento e síntese de proteínas, estimula proliferação e progressão do ciclo celular Assim, a presença da superexpressão de HER2 no tecido mamário canceroso está associado com a malignidade do tumor Estudos in vitro na literatura sugerem que a estimulação de HER2 minimiza o estresse oxidativo reduzindo os danos a estruturas celulares e algumas das vias ativadas por HER2 podem ser mediadas por produtos do estresse oxidativo e espécies reativas de oxigênio Sabe-se que o estresse oxidativo pode ser modulador, onde o estresse oxidativo moderado pode estimular a proliferação celular enquanto estresse oxidativo alto pode levar a morte celular Assim, HER2 super-expresso pode desempenhar um papel protetor para o tumor contra danos mediados pelo estresse Tais constatações são baseadas na relação indireta entre mediadores do estresse oxidativo e HER2 obtidas por estudos in vitro e a influência da superexpressão de HER2 em parâmetros oxidante/ antioxidante em humanos permanece desconhecida Neste trabalho objetivamos investigar o perfil pro/ antioxidante em mulheres portadoras de tumor HER2 positivo Pacientes e Métodos: Este estudo foi aprovado pelo Conselho Nacional de Pesquisa e Ética (CAAE 9268-7) e pacientes assinaram consentimento informado As mulheres foram divididas em controles saudáveis (52) pareados por idade e mulheres com câncer de mama (52- BC) O grupo BC foi dividido em 3 mulheres negativas para presença de HER2 (HER-) e 22 mulheres positivas para presença de HER2 (HER+) determinada por imunohistoquímica (IHC) empregando o método da estreptavidina-biotina ou hibridização fluorescente in situ (FISH) para IHC 2+ Critérios de exclusão foram fumantes, consumidores de álcool, usuários de suplementos antioxidantes, gravidez, lactação, o excesso de praticas de exercícios físicos, usuários de terapia de reposição hormonal e com outras doenças crônicas Caracterizações dos pacientes incluíram idade no momento do diagnóstico, classificação TNM (T = tumor, N = linfonodo, M = metástase), grau histológico do tumor, receptores hormonais (receptores de estrógeno - ER, receptores de progesterona - PR) e tratamento de quimioterapia O sangue dos participantes foi coletado no Departamento de Patologia Geral, Universidade Estadual de Londrina, PR-Brasil e centrifugado para obtenção de hemácias (RBC) e plasma Análises bioquímicas foram realizadas em amostras de plasma para avaliar danos cardíacos, renais e hepáticos através da medição de creatina-quinase total (CKT) e fração MB (CKMB), uréia, creatinina, aspartato-aminotransferase (AST), alanina-aminotransferase (ALT), gama -glutamil transpeptidase (GGT) e bilirrubina total Para avaliação do metabolismo do ferro, ferritina e ferro plasmático foram mensurados Níveis de 4 ácido úrico também foram avaliados Para avaliar o estresse oxidativo em amostras de RBC e plasma, um método baseado em quimiluminescência foi empregado (QL) Os níveis de malondialdeído (MDA) foram determinados através de um novo método padronizado em cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) Níveis plasmáticos de 8-isoprostano F2 livre foram quantificados utilizando um kit imunoenzimático competitivo após a hidrólise alcalina de ésteres isoprostanos por reação ELISA (do inglês, Enzime Linked Immuno Assay Sorbent) Avaliação dos níveis de nitrito como estimativa de óxido nítrico (NO) plasmatico foi estimado empregando o sistema de reação cádmio-cobre-Griess O conteúdo de proteínas carboniladas foram avaliadas pelo método da dinitrofenilhidrazina (DNPH) Para avaliar o perfil antioxidante, capacidade antioxidante total (TRAP) foi realizada por QL Nós também determinamos a atividade da ezima superóxido dismutase (SOD) através do método de inibição da auto-oxidação do pirogalol e determinamos a atividade da enzima catalase através do método de avaliação da degração do peróxido de hidrogênio Os níveis de glutationa reduzida (GSH) foram determinados através do método de reação com 5, 5 '- dithiobis - 2 - ácido nitrobenzóico (DTNB) Todas as análises foram realizadas em triplicatas Análise estatística foram realizadas utilizando GraphPad Prism versão 5 (GraphPad Software, San Diego, CA), Microsoft Office Excel 27 e OriginLab software 8 Os resultados foram expressos como média aritmética e erro padrão das médias (SEM) Diferenças entre os grupos foram avaliados por análise de variância Two-Way (Two-Way ANOVA) para as curvas de peroxidação lipídica, com teste de Bonferroni como pos-hoc, qui-quadrado e teste exato de Fisher para dados clinicopatológicos, e teste t de Student não pareado ou Mann-Whitney para outros parâmetros Todos os dados foram verificados no Software GraphPad para eliminar outliers significativos (p< 5) As diferenças foram consideradas estatisticamente significantes quando p < 5pt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Introduction and Aims: Breast cancer is the most lethal malignancy in women worldwide, and during its development, about 2% of patients show overexpression of human epidermal growth factor receptor-2 (HER2/neu, also known as ErbB2) HER2 family embraces four members present as dimmers in cell surface: HER1, HER2, HER3 and HER4 HER2 can dimerize with another HER2 or with HER1, HER3 or HER4 Overexpression of these receptors present prolonged signaling activity and through distinct pathways they can mediate several transcriptional factors that decrease apoptosis, augmenting cell survival, increase cell migration, tumor progression, growth, and protein synthesis, stimulates proliferation and cellular cycle progression Thus, presence of overexpressed HER2 in breast cancer tissue is associated with tumor malignancy In vitro studies in the literature suggest that HER2 stimulation minimize oxidative stress leading to reducing damage to cell structures and some of those HER2 activated pathways can be mediated by products of oxidative stress and reactive oxygen species It is known that oxidative stress can modulate cellular fate, as mild oxidative stress can stimulates cell proliferation and higher oxidative stress can lead to cell death Thus, HER2 overexpression may play a protective role for the tumor against damage mediated by stress Such findings are based on the indirect relationship between mediators of oxidative stress and HER2 obtained by in vitro studies and the influence of HER2 overexpression in oxidant/ antioxidant parameters in humans remains unknown In this report, we aimed to investigate the pro/ antioxidant profile in women bearing HER2 positive tumor Subjects and Methods: This study was approved by Research and Ethics National Council (CAAE 9268-7) and patients provided signed informed consent Women were divided into 52 healthy age-matched controls and 52 breast cancer women (BC) BC group was divided into 3 negative for HER2 presence (HER-) and 22 positive for HER2 presence (HER+) determined by immunohistochemical (IHC) employing streptavidin biotin method or fluorescence in situ hybridization (FISH) for IHC 2+ Excluded criteria were smokers, regular alcohol consumers, antioxidant supplement users, pregnancy, lactation, excessive physical exercises practitioners, hormone replacement therapy users and with another chronic disease Patients’ characterization included age at diagnosis, TNM (T= tumor, N= node, M= metastasis) classification, histological tumor grade, hormonal receptors (estrogen receptors - ER, progesterone receptors - PR) and chemotherapy treatment Heparinized blood was collected at Department of General Pathology, Londrina State University, PR-Brazil and centrifuged for red blood cells (RBC) and plasma obtainment Biochemical analysis were performed in plasma samples to assess heart, kidneys and liver damage through measurement total creatine-kinase (CKT) and MB fraction (CKMB), urea, creatinine, aspartate-aminotransferase (AST), alanine-aminotransferase (ALT), gamma-glutamyl-transpeptidase (GGT) and total bilirubin To assay iron metabolism, ferritin and plasmatic iron were measured Levels of uric acid were also evaluated To evaluate oxidative stress in RBC and plasma samples, a chemiluminescence-based method was employed Malondialdehyde (MDA) levels was determined improving a new method was adapted by high performance liquid chromatography (HPLC) Free 8-Isoprostane F2 plasmatic levels were quantified with a competitive immunoenzymatic kit after alcaline hydrolysis of isoprostanes esters by Enzime 8 Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA) reaction Evaluation of nitrite levels as estimative of nitric oxide (NO) concentration in plasma sample was estimated employing cadmium-copper-Griess reaction system Protein Carbonyls content was evaluated by dinitrophenilhidrazine (DNPH) method To evaluate antioxidant profile, total radical antioxidant parameter (TRAP) thought chemiluminescence assay was performed We also determined superoxide dismutase activity through auto-oxidation inhibition of pirogalol method and catalase activity through hydrogen peroxide degradation method Erythrocytic reduced glutathione (GSH) levels was determined through 5, 5’ – dithiobis – 2 – nitrobenzoic acid (DTNB) method All analysis were conducted in triplicate sets Statistical analysis were perfomed using GRAPHPAD PRISM version 5 (GRAPHPAD Software, San Diego, CA), Microsoft Office Excel 27 and OriginLab 8 software Results were expressed as arithmetic means and standard error of means (SEM) Differences among groups were assessed by two-way analysis of variance (ANOVA) to lipid peroxidation curves, with Bonferroni´s test as pos-hoc, qui-square and Fisher’s exact test for clinicapathological data, and Student’s unpaired t Test or Mann-Whitney to others parameters All data were checked in GraphPad Software to eliminate significant outliers (p< 5) Differences were considered statistically significant when p< 5pt_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Patologia Experimental) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Patologia Experimentalpt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/11245
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenamePatologia Experimentalpt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Biológicaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Patologia Experimentalpt_BR
dc.subjectMamaspt_BR
dc.subjectCâncerpt_BR
dc.subjectTumorespt_BR
dc.subjectExpressãopt_BR
dc.subjectOncologiapt_BR
dc.subjectCancerpt_BR
dc.subjectGene expressionpt_BR
dc.subjectOncologypt_BR
dc.subjectTumorspt_BR
dc.subjectBreastpt_BR
dc.titleRelação entre a superexpressão do receptor do fator de crescimento epitelial humano (HER-2) e estresse oxidativo em pacientes portadoras do câncer de mamapt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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