Caracterização in silico e in vivo do promotor do gene galactinol sintase de Coffea spp

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dataload.collectionmapped01 - Doutorado - Genética e Biologia Molecularpt_BR
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dc.contributor.advisorPereira, Luiz Filipe Protasio [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorGirotto, Larissapt_BR
dc.contributor.bancaMolinari, Hugo Bruno Correapt_BR
dc.contributor.bancaVilas-Bôas, Laurival Antôniopt_BR
dc.contributor.bancaCação, Sandra Maria Bellodipt_BR
dc.contributor.bancaIvamoto-Suzuki, Suzana Tiemipt_BR
dc.contributor.coadvisorSantos, Tiago Benedito dos [Coorientador]pt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T11:54:31Z
dc.date.available2024-05-01T11:54:31Z
dc.date.created2020.00pt_BR
dc.date.defesa31.01.2020pt_BR
dc.description.abstractResumo: O café, é uma das mais importantes commodities agrícolas, sendo o Brasil seu maior produtor e exportador As mudanças climáticas globais têm causados danos a produtividade agrícola cafeeira com impactos econômicos e sociais, incluindo a redução de áreas disponíveis para o plantio de café Uma das alternativas biotecnológicas para resolver esse problema é produção de cafeeiros geneticamente modificados e tolerantes a estresses abióticos Diante desse cenário foi investigado o potencial do promotor da galactinol sintase (GolS) do gênero Coffea, que catalisa a primeira etapa da via de síntese dos oligossacarídeos da família da Rafinose, cujo acúmulo ocorre em resposta a estresses abióticos Entender a arquitetura dos promotores de café, tornou-se fundamental para modular a regulação da expressão gênica em períodos de estresse abióticos 1 promotores de GolS foram encontrados nos genomas públicos disponíveis de Coffea spp Estes apresentaram 12 diferentes tipos de cis-elementos que regulam a resposta gênica e são induzidos por estresses ambientais Os que mais se destacaram foram ARE (indução anaeróbica), ABRE e MYB (resposta do Ácido abscísico - ABA) e STRE (presente nos promotores de genes que são regulados durante o estresse) Após a caracterização dos promotores, um promotor GolS, isoforma de Coffea canephora (Cc), foi selecionado e clonado com o objetivo de verificar a sua expressão em experimentos de estresse abiótico induzido O promotor CcGolS3 fusionado ao gene repórter da ß-glucuronidase (GUS) foi utilizado para transformar Arabidopsis thaliana Para analisar a atividade deste promotor, as plantas transformadas foram submetidas a estresses hídrico, salino e de temperatura A atividade do gene GUS foi analisada histoquimicamente e por RTqPCR A coloração histoquímica do gene repórter GUS foi verificada em todos os tecidos de A thaliana que possuiam a construção pCcGolS3::GUS, provavelmente devido a uma atividade leaky do promotor As análises de RT-qPCR do promotor de CcGolS3 evidenciou o aumento no número de transcritos de GUS em plantas sob estresse hídrico, salino e de frio, mesmo com a presença do leaky, comportando-se como um promotor do tipo estresse-induzido e demonstrando o potencial uso do mesmo em projetos futuros de transformação de plantaspt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Coffee is one of the most important agricultural commodities, and Brazil is its largest producer and exporter Global climate change has damaged coffee agricultural productivity with economic and social impacts, including the reduction of areas available for coffee planting One of the biotechnological alternatives to reduce this problem is genetically modified coffee to be tolerant to abiotic stress In this scenario, the potential of the galactinol synthase (GolS) promoter of Coffea spp, which catalyzes the first step of rafinosis family oligosaccharides biosynthesis, whose accumulation occurs mainly in response to abiotic stresses Understanding the structure and composition of coffee promoter gene sequences is of fundamental to better understand the genetic mechanisms and processes of gene expression regulation induced in periods of drought and salt stress We analysed 1 GolS promoters present in the public genomes of Coffea arabica, C canephora and C eugenioides Those promoters presented, 12 cis-elements related to gene regulation in response to adverse conditions, including ARE (anaerobic induction), ABRE and MYB (abscisic acid response - ABA) and STRE (present in promoters that are regulated during stress) Subsequently in silico characterization of C canephora CcGolS3 was perfomed and this promoter was cloned in order to verify its role against abiotic stresses Plasmids containing the pCcGolS3::GUS construction (ß-glucuronidase reporter gene) were used to transform Arabidopsis thaliana to analyze GolS promoter activity under stress Transformed plants were subjected to water deficit, salt and temperature stresses experiment Activity of GUS reporter gene was analyzed histochemically and by RTqPCR Histochemical staining of GUS reporter gene was verified in all A thaliana tissues in plants containing pCcGolS3::GUS construct, probably due to a leaky activity RT-qPCR analyzes of CcGolS3 promoter showed an increase in the number of GUS transcripts in plants under drought, saline and cold stress, even with the leaky effect, demonstrating its potential use as stress-induced promoter for future plant genetic engineering transformation projectspt_BR
dc.description.notesTese (Doutorado em Genética e Biologia Molecular) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética e Biologia Molecularpt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/9279
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeDoutoradopt_BR
dc.relation.coursenameGenética e Biologia Molecularpt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Biológicaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Genética e Biologia Molecularpt_BR
dc.subjectCafépt_BR
dc.subjectMelhoramento genéticopt_BR
dc.subjectGalactinol sintasept_BR
dc.subjectMudanças climáticaspt_BR
dc.subjectBioinformáticapt_BR
dc.subjectCoffeept_BR
dc.subjectGalactinol synthasept_BR
dc.subjectClimatic changespt_BR
dc.subjectBioinformaticspt_BR
dc.subjectBreedingpt_BR
dc.titleCaracterização in silico e in vivo do promotor do gene galactinol sintase de Coffea spppt_BR
dc.typeTesept_BR

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