Efeito antifúngico do extrato da casca de Poincianella pluviosa e sinergismo com anfotericina B sobre Cryptococcus spp

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dataload.collectionmapped02 - Mestrado - Microbiologiapt_BR
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dc.contributor.advisorOgatta, Sueli Fumie Yamada [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorAndriani, Gabriella Mariapt_BR
dc.contributor.bancaTavares, Eliandro Reispt_BR
dc.contributor.bancaSantos, Pollyana Myrella Capela dospt_BR
dc.contributor.bancaFaccin-Galhardi, Ligia Carlapt_BR
dc.contributor.coadvisorTavares, Eliandro Reis [Coorientador]pt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T14:28:58Z
dc.date.available2024-05-01T14:28:58Z
dc.date.created2018.00pt_BR
dc.date.defesa14.12.2018pt_BR
dc.description.abstractResumo: As leveduras dos complexos Cryptococcus gattii e Cryptococcus neoformans são agentes etiológicos da criptococose, doença invasiva e potencialmente fatal em indivíduos imunossuprimidos e imunocompetentes A anfotericina B é o fármaco de escolha, no entanto, seu caráter tóxico dificulta a sua utilização em períodos prolongados, enquanto que outros antifúngicos disponíveis mostram-se menos efetivos Além disso, sabe-se que há um progressivo relato de cepas resistentes às terapias consolidadas Neste contexto, os produtos naturais constituem-se em fontes promissoras para o isolamento de novas moléculas antimicrobianas Estudos com as leguminosas do gênero Poincianella mostraram inúmeras propriedades biológicas, como atividade antimicrobiana, anti-inflamatória e antioxidante Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar o potencial antifúngico do extrato da casca de P pluviosa (sibipiruna) e sua combinação com antifúngicos comerciais sobre células planctônicas e sésseis de cepas de referência e isolados clínicos dos complexos C gattii e C neoformans A concentração inibitória mínima (CIM) do extrato bruto (EB), fração etil acetato (FAc) e fração FC (FC) foi determinada pelo método de microdiluição em caldo e a concentração fungicida mínima (CFM) considerada aquela capaz de inibir 1% a contagem de unidades formadoras de colônia (UFC), comparado com um controle de crescimento não tratado A CIM para EB variou de 62,25 a >1 µg/mL, FC 15,62 a >1 µg/mL e FAc 31,25 a >1 µg/mL, que, por exibir melhor perfil de sensibilidade, foi selecionada para as análises subsequentes O efeito da combinação entre a FAc e os antifúngicos comerciais fluconazol e anfotericina B foi realizado pelo método de checkerboard e os resultados interpretados utilizando o Índice da Concentração Inibitória Fracionária (FICI) A combinação entre fluconazol e FAc foi considerada sinérgica somente para C neoformans ATCC 6631 e C neoformans IV A combinação entre anfotericina B e FAc mostrou-se sinérgica para todas as cepas testadas, C gattii ATCC 2465, C gattii II, C neoformans ATCC 6631 e C neoformans IV, com FICI de ,34; ,125, ,69 e ,34 respectivamente e por esse motivo foi escolhida para os demais experimentos A cinética do tempo de morte das células planctônicas em presença da CIM de FAc sozinha e em combinação com o antifúngico foi analisada durante 72 horas, exibindo ação fungistática para todos os isolados testados O efeito inibitório de FAc sozinha e em combinação com anfotericina B foi também avaliado durante a fase de formação e sobre o biofilme maduro, resultando em inibição significativa da atividade metabólica A maior porcentagem de inibição foi observada para C gattii ATCC 2465 na fase inicial de formação (57,93%) e sobre o biofilme formado (68,1%), seguido por C neoformans ATCC 6631 (24,3 – 36,2%) A combinação com anfotericina B teve efeito sinérgico sobre as duas cepas somente na fase de formação do biofilme, com redução dos valores de SCIM superior a 16 vezes Esses resultados indicam o potencial antifúngico da FAc da casca de P pluviosa sozinha e em combinação com anfotericina B Esta planta pode ser uma fonte importante de novas moléculas com atividade antifúngica para formulação de produtos e utilização em tratamentos da criptococosept_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Cryptococcus gattii and Cryptococcus neoformans complexes are etiological agents of cryptococcosis, a potentially fatal infectious disease that affects both immunocompromised and immunocompetent individuals Amphotericin B is the gold standard, however, its toxicity makes its prolonged use difficult while other available antifungal agents are less effective In addition, it is well isolates exhibiting resistance to these antimicrobials are increase In this context, plants consist in a promising source for the isolation of new antimicrobial molecules Studies with Poincianella genus have shown a number of biological properties, such as antimicrobial, anti-inflammatory and antioxidant activity The aim of this work was to evaluate the antifungal potential of Poincianella pluviosa bark extract (sibipiruna) and its combination with commercial antifungals on planktonic and sessile cells of reference strains and clinical isolates of C gattii and C neoformans complexes The minimal inhibitory concentration (MIC) of the crude extract (EB), acetate fraction (FAc) and FC fraction (FC) was determined by broth microdilution assay and minimum fungicidal concentration (MFC) was considered the one that inhibited 1% of colony forming unit (CFU) counts, compared to the untreated growth control The MICs ranged from 6225 to >1 µg/mL for EB, 1562 to >1 µg/mL for FC and 3125 to >1 µg/mL for FAc Due to its best sensitivity profile, FAc was selected for further analyzes The effect of the combination between FAc and fluconazole or amphotericin B was evaluated by the checkerboard method and the results interpreted using the fractional inhibitory concentration index (FICI) The combination between fluconazole and FAc was only considered synergistic for C neoformans ATCC 6631 and C neoformans IV The combination between amphotericin B and FAc was synergistic for all isolates tested, C gattii ATCC 2465, C gattii II, C neoformans ATCC 6631 and C neoformans IV, with FICI of 34; 125, 69 and 34 respectively Due to its best FICI values, this combination was chosen for the other experiments The time-kill kinetics of planktonic cells were evaluated in presence of MIC of FAc alone and in combination with the antifungal during 72 hours, exhibiting fungistatic activity against all isolates tested The inhibitory effect of FAc alone and combined with amphotericin B was evaluated during the formation and against mature biofilms, resulting in significant inhibition of the metabolic activity even at the lowest concentration tested The best percentage inhibition was observed for C gattii ATCC 2465 during the initial phase (5793%) and mature biofilm (681%), followed by C neoformans ATCC 6631 (24,3 – 36,2%) The combination treatment exhibited a synergistic effect against formation stages of these two strains only in the biofilm formation with 16-fold SCIM values reduction These results highlight the antifungal potential of FAc from P pluviosa bark extract, alone or in combination with amphotericin B This plant may be an important source of new molecules with antifungal activity for product formulation and use in cryptococcosis treatmentpt_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Microbiologia) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Microbiologiapt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/14146
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenameMicrobiologiapt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Biológicaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Microbiologiapt_BR
dc.subjectFungos patogênicospt_BR
dc.subjectCriptococosept_BR
dc.subjectMicrobiologia médicapt_BR
dc.subjectCryptococosispt_BR
dc.subjectVirulence (Microbiology)pt_BR
dc.subjectPathogenic fungipt_BR
dc.titleEfeito antifúngico do extrato da casca de Poincianella pluviosa e sinergismo com anfotericina B sobre Cryptococcus spppt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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