Métodos de cultivo e criopreservação do tecido ovariano bovino

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dc.contributor.advisorSeneda, Marcelo Marcondes [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorSilva, Camila Bizarro dapt_BR
dc.contributor.bancaAndrade, Evelyn Rabelopt_BR
dc.contributor.bancaBlaschi, Wanessapt_BR
dc.contributor.bancaLandim, Fernanda da Cruzpt_BR
dc.contributor.bancaSudano, Mateus Josépt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T11:46:00Z
dc.date.available2024-05-01T11:46:00Z
dc.date.created2019.00pt_BR
dc.date.defesa25.02.2019pt_BR
dc.description.abstractResumo: Um grande número de biotecnologias têm sido desenvolvidas para preservação da fertilidade humana e animal, principalmente referente ao crescimento e preservação folicular Deste modo, os avanços nas biotécnicas de cultivo in vitro e criopreservação de folículos pré-antrais são fundamentais para investigação da foliculogênese e no aporte do tratamento de doenças reprodutivas O objetivo deste trabalho foi desenvolver uma estratégia viável de cultivo in vitro de folículos pré-antrais e um protocolo eficiente de criopreservação de tecido ovariano de fêmeas bovinas para incrementar a eficie^ncia reprodutiva, atrave´s da: I) Avaliação do efeito de diferentes métodos de cultivo in vitro e II) Determinação da melhor concentração de dimetilsulfóxido (DMSO) ao protocolo de vitrificação do tecido ovariano de bovinos No experimento I, os fragmentos foram cultivados in vitro e distribuídos aleatoriamente em quatro grupos: i) cultivo padrão, diretamente em placa de cultivo (2D), ii) cultivo suporte, sobre uma monocamada de gel de agarose (2D); iii) cultivo imerso, sobre gel de agarose imerso no meio (2D) e; iv) cultivo Millicell-Biopore (3D) Os dados foram submetidos aos testes de ANOVA (p=,5) Foram avaliados 133 folículos pré-antrais na análise morfológica Os fragmentos cultivados sobre o suporte de gel de agarose apresentaram uma maior proporção de folículos íntegros (75,3%; 113/15) em comparação aos demais grupos (p<,5) aos seis dias de cultivo, enquanto aos quatorze dias, os cultivos padrão, suporte e imerso possibilitaram um maior percentual de folículos morfologicamente íntegros: 54,7% (82/15), 58% (87/15) e 547% (82/15), respectivamente, quando em comparação ao cultivo Millicell (35,3%; 53/15; p>,5) Os níveis de espécies reativas de oxigênio (EROs) e capacidade antioxidante das amostras cultivadas pelos quatro métodos apresentaram redução dos níveis de ânion superóxido e da capacidade antioxidante quando comparadas ao grupo controle não cultivado Para o experimento II o córtex ovariano foi fragmentado e dividido em um tratamento controle (não vitrificado) e três grupos vitrificados: I) 1M de DMSO; II) 1,5M de DMSO e III) 3M de DMSO Os fragmentos ovarianos ficaram vitrificados durante 7 dias e posteriormente analisados por histologia, presença de espécie reativas de oxigênio e reativação e crescimento folicular (cultivo in vitro) Imediatamente após a vitrificação/aquecimento, os fragmentos ovarianos criopreservados em 1M, 1,5M e 3M de DMSO mostraram porcentagens semelhantes (p>,5) de folículos íntegros Entretanto, apenas a concentração de 3M de DMSO diferiu do controle não vitrificado (33,9% e 81,3%, respectivamente; p<,5) A análise de radicais livres e a capacidade antioxidante demonstrou a concentração de 3M de DMSO apresentou maior concentração de EROs quando comparada a demais concentrações de DMSO (p<,5) Após o cultivo in vitro dos fragmentos vitrificados/aquecidos a concentração de 1M de DMSO apresentou maiores porcentagens de folículos morfologicamente íntegros que as demais contrações (47,7%; p<,5) Em conclusão, o cultivo suporte proporcionou a manutenção da integridade morfológica, maiores diâmetros e capacidade antioxidante dos folículos pré-antrais Ainda, podemos sugerir que os folículos pré-antrais bovinos podem ser criopreservados in situ com maior eficiciência em 1M de DMSOpt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: A large number of biotechnologies have been developed for the preservation of human and animal fertility, mainly referring to follicular growth and preservation Thus, advances in in vitro culture biotechnics and cryopreservation of preantral follicles are fundamental for the investigation of folliculogenesis and for the treatment of reproductive diseases The objective of this work was to develop a viable strategy of in vitro culture of preantral follicles and an efficient protocol of cryopreservation of ovarian tissue of bovine females to increase the reproductive efficiency, through: I) Evaluation of the effect of different methods of culture in vitro and II) Determination of the best concentration of dimethylsulfoxide (DMSO) to the protocol of vitrification of bovine ovarian tissue In experiment I, the fragments were cultured in vitro and randomly distributed into four groups: i) standard culture, directly on culture plate (2D), ii) support culture, on an agarose gel (2D) monolayer; iii) immersed culture on agarose gel immersed in the medium (2D); iv) Millicell-Biopore culture (3D) Data were submitted to ANOVA tests (p=5) Preantral follicles 133 were evaluated in the morphological analysis The fragments cultured on the agarose gel support showed a higher proportion of intact follicles (753%; 113/15) compared to the other groups (p<5) at the six days of culture, whereas at fourteen days, (87/15), and 547% (82/15), respectively, when compared to the Millicell culture (353%, 53/15; p> 5) The levels of reactive oxygen species (ROS) and antioxidant capacity of the samples cultured by the four methods showed a reduction of superoxide anion levels and antioxidant capacity when compared to the non - cultivated control group For experiment II the ovarian cortex was fragmented and divided into a control treatment (not vitrified) and three vitrified groups: I) 1M DMSO; II) 15M DMSO and III) 3M DMSO The ovarian fragments were vitrified for 7 days and later analyzed by histology, presence of reactive oxygen species and reactivation and follicular growth (in vitro culture) Immediately after vitrification/warming, cryopreserved ovarian fragments in 1M, 15M and 3M DMSO showed similar percentages (p>5) of whole follicles However, only the concentration of 3M DMSO differed from the non-vitrified control (339% and 813%, respectively, p<5) The analysis of free radicals and the antioxidant capacity demonstrated the concentration of 3M DMSO presented higher concentration of ROS when compared to other concentrations of DMSO (p<5) After in vitro culture of the vitrified/warming fragments the concentration of 1M DMSO presented higher percentages of morphologically intact follicles than the other contractions (477%; p<5) In conclusion, the support culture provided the maintenance of the morphological integrity, larger diameters and antioxidant capacity of the preantral follicles Furthermore, we can suggest that bovine preantral follicles can be cryopreserved in situ with greater efficiency in 1M DMSOpt_BR
dc.description.notesTese (Doutorado em Ciência Animal) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animalpt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/8965
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeDoutoradopt_BR
dc.relation.coursenameCiência Animalpt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Agráriaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-graduação em Ciência Animalpt_BR
dc.subjectBovinopt_BR
dc.subjectReproduçãopt_BR
dc.subjectFolículos ovarianospt_BR
dc.subjectReprodução animalpt_BR
dc.subjectCattle - Reproductionpt_BR
dc.subjectOvarian folliclespt_BR
dc.subjectAnimal reproductionpt_BR
dc.titleMétodos de cultivo e criopreservação do tecido ovariano bovinopt_BR
dc.typeTesept_BR

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