Mecanismos antiproliferativos do tratamento in vitro com trans-chalcona em linhagens de carcinoma cervical humano

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dc.contributor.advisorPanis, Carolina
dc.contributor.authorSiqueira, Elaine da Silva
dc.contributor.bancaAmarante, Marla Karine
dc.contributor.bancaMantovani, Mário Sérgio
dc.contributor.bancaOliveira, Karen Brajão de
dc.contributor.bancaVictorino, Vanessa Jacob
dc.coverage.extent110 p.
dc.coverage.spatialLondrina
dc.date.accessioned2024-10-15T16:56:13Z
dc.date.available2024-10-15T16:56:13Z
dc.date.issued2023-09-28
dc.description.abstractMoléculas derivadas de plantas medicinais tem sido fonte de pesquisa para novas terapias antineoplásicas como monoterapia ou terapia adjuvante. Neste estudo, investigamos o impacto do tratamento com trans-chalcona (TC) sobre duas linhagens celulares de diferentes tipos histológicos de carcinoma cervical, com destaque para o adenocarcinoma (HeLa) e carcinoma de células escamosas (SiHa). As linhagens foram tratadas com concentrações crescentes de trans-chalcona (6,25 - 100 µM) e a concentração inibitória de 50% das células (IC50) foi determinada em 28 µM (HeLa) e 23 µM (SiHa) em 24 horas. Para avaliar os mecanismos de ação envolvidos foram realizados ensaios para determinar a viabilidade celular por 3-(4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-difenil brometo de tetrazolina (MTT) e azul de tripan, microscopia de varredura (MEV) e transmissão (MET) para constatar alterações morfológicas e ultraestruturais, bem como os possíveis mecanismos de morte envolvidos e análises de estresse oxidativo, que incluíram a avaliação do perfil de despolarização mitocondrial, dosagem dos níveis de hidroperóxidos , determinação da capacidade antioxidante, dosagem dos metabólitos do óxido nítrico e avaliação dos perfis dos fatores de transcrição reguladores do balanço redox NRF2 e NFkB, realizados por marcação com tetrametilrodamina-etil-éster (TMRE), terc-butil hidroperóxido, parâmetro antioxidante total de captura de radicais (TRAP), diclorofluoresceína (DCF) e imunofluorescência, respectivamente. Observamos que o tratamento com TC em linhagens HeLa e SiHa de carcinoma cervical foi capaz de promover a redução da viabilidade celular, induzir alterações morfológicas e ultraestruturais com inibição da capacidade de migração do tecido nas duas linhagens. Posteriormente, descobrimos que o tratamento com TC foi capaz de promover despolarização mitocondrial, induzir a formação de gotículas lipídicas e vacúolos autofágicos com consequente morte celular por apoptose tardia. A TC também induziu a geração de estresse oxidativo observada pelo aumento da geração de hidroperóxidos na linhagem Hela e diminuição em SiHa. Houve ainda redução na produção dos metabólitos do NOx em ambos modelos avaliados. Concomitantemente, observamos superexpressão de NRF2 e diminuição da regulação do NF?B em células HeLa, enquanto na linhagem SiHa houve apenas estímulo de NF?B. Estes achados sugerem que a TC exerce seu efeito antiproliferativo no câncer cervical a partir da redução significativa da viabilidade das células HeLa e SiHa em todos os tempos testados (p=0,0001), indução de atividade citostática e geração de estresse oxidativo via distintos mecanismos de acordo com a origem e tecido acometido, tornando-se uma alternativa terapêutica promissora no desenvolvimento de compostos antitumorais frente ao carcinoma cervical.
dc.description.abstractother1Molecules derived from medicinal plants have been a source of research for new antineoplastic therapies as monotherapy or adjuvant therapy. In this study, we investigated the impact of trans-chalcone (TC) treatment on two cell lines representing different histological types of cervical carcinoma, especially adenocarcinoma (HeLa) and squamous cell carcinoma (SiHa). The lineages were treated with increasing concentrations of trans-chalcone (6.25 - 100 µM) and the 50% cell inhibitory concentration (IC50) was determined at 28 µM (HeLa) and 23 µM (SiHa) in 24 hours. In order to assess the mechanisms of action involved, tests were carried out to determine cell viability using 3-(4,5-dimethylthiazol-2yl)-2,5-diphenyl tetrazoline bromide (MTT) and trypan blue, scanning (SEM) and transmission (MET) microscopy to determine morphological and ultrastructural changes, as well as the possible death mechanisms involved and oxidative stress analyses, which included assessing the mitochondrial depolarization profile, dosage of hydroperoxide levels, determination of antioxidant capacity, dosage of nitric oxide metabolites and evaluation of the profiles of the redox balance regulating transcription factors NRF2 and NFkB, carried out using tetramethylrhodamine-ethyl ester (TMRE) labeling, tert-butyl hydroperoxide, total radical scavenging antioxidant parameter (TRAP), dichlorofluorescein (DCF) and immunofluorescence, respectively. We observed that treatment with TC in HeLa and SiHa cervical carcinoma cell lines was capable of promoting a reduction in cell viability, inducing morphological and ultrastructural alterations with inhibition of tissue migration capacity in both cell lines. Subsequently, we found that treatment with TC was able to promote mitochondrial depolarization, induce the formation of lipid droplets and autophagic vacuoles with consequent cell death by late apoptosis. TC also induced the generation of oxidative stress, observed by an increase in the generation of hydroperoxides in the Hela and a decrease in SiHa cell. There was also a reduction in the production of NOx metabolites in both models. At the same time, we observed overexpression of NRF2 and downregulation of NF?B in HeLa cells, while in the SiHa cell there was only stimulation of NF?B. These findings suggest that TC exerts its antiproliferative effect on cervical cancer by significantly reducing the viability of HeLa and SiHa cells at all times tested (p=0.0001), inducing cytostatic activity and generating oxidative stress via different mechanisms depending on the origin and tissue affected, making it a promising therapeutic alternative in the development of antitumor compounds against cervical carcinoma.
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/18051
dc.language.isopor
dc.relation.departamentCCS - Departamento de Clínica Médica
dc.relation.institutionnameUniversidade Estadual de Londrina - UEL
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Fisiopatologia Clínica e Laboratorial
dc.subjectCarcinoma de células escamosas
dc.subjectAdenocarcinoma
dc.subjectFlavonóides
dc.subjectEstresse oxidativo
dc.subjectAlterações metabólicas
dc.subjectFisiopatologia clínica
dc.subject.capesCiências da Saúde - Medicina
dc.subject.cnpqCiências da Saúde - Medicina
dc.subject.keywordsSquamous cell carcinoma
dc.subject.keywordsAdenocarcinoma
dc.subject.keywordsFlavonoids
dc.subject.keywordsOxidative stress
dc.subject.keywordsMetabolic alterations
dc.titleMecanismos antiproliferativos do tratamento in vitro com trans-chalcona em linhagens de carcinoma cervical humano
dc.title.alternativeAntitumor mechanisms of in vitro treatment with trans-chalcone in cervical carcinoma cell lines
dc.typeTese
dcterms.educationLevelDoutorado
dcterms.provenanceCentro de Ciências da Saúde

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